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黑龍江二代測序運用

來源: 發布時間:2024-12-20

二代測序——甲基化的作用和檢測方法有哪些?

作用

基因表達調控:DNA 甲基化通常與基因沉默有關。例如,在**發生過程中,某些抑*基因的啟動子區域(調控基因轉錄起始的 DNA 序列)可能會發生高甲基化,導致這些基因無法正常表達,從而失去對腫瘤細胞生長的抑制作用。

發育調控:在胚胎發育過程中,DNA 甲基化模式的動態變化對于細胞分化和組織***形成至關重要。不同的細胞類型具有特定的 DNA 甲基化圖譜,這些圖譜引導細胞向特定的方向分化。

檢測方法

亞硫酸鹽測序法:這是一種能夠精確檢測 DNA 甲基化狀態的方法。其原理是利用亞硫酸鹽處理 DNA,未甲基化的胞嘧啶會被轉化為尿嘧啶,而甲基化的胞嘧啶則保持不變。經過 PCR 擴增和測序后,可以區分甲基化和未甲基化的位點。 二代測序的成本比一代測序高嗎?黑龍江二代測序運用

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不同二代測序技術平臺的速度

Illumina 測序平臺:這是目前市場上應用較為***的二代測序平臺之一,其測序速度較快。例如 Illumina NovaSeq 系列,一次運行可以在 1-3 天內產生大量的數據,通量可達數億甚至數十億條讀長,能夠滿足大規模基因組學研究和臨床檢測的需求。

Roche 454 測序平臺:Roche 454 測序系統的測序速度也較快,其特點是測序片段比較長,高質量的讀長能達到 400bp 左右,一次運行可以在 24 小時左右完成對一定數量樣本的測序。

BGISEQ 系列:華大智造的 BGISEQ 系列測序儀在速度上也有出色表現,如全球二代測序速度**快設備 E25 量產,為快速測序提供了有力支持 靜安區二代測序檢測一代、二代、三代測序的區別是什么?

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二代測序的建庫步驟④

四、接頭連接

接頭選擇:根據測序平臺的要求選擇合適的接頭。不同的二代測序平臺(如Illumina、IonTorrent等)有各自特定設計的接頭。這些接頭包含與測序平臺的流動池(flowcell)表面互補的序列,用于將DNA片段固定在測序芯片上,還包含用于區分不同樣本的索引序列(index)等。

連接反應:使用DNA連接酶將接頭與DNA片段連接。T4DNA連接酶是常用的連接酶,它可以在ATP(三磷酸腺苷)存在下,將接頭的5'-磷酸基團與DNA片段的3'-羥基形成磷酸二酯鍵,從而將接頭連接到DNA片段的兩端。連接反應的條件(如溫度、連接酶的用量、反應時間等)需要根據具體的實驗要求進行優化,以確保較高的連接效率。

二代測序——基因組測序該測幾個G?

1、人類全基因組測序

常規全基因組測序:一般建議測序深度為30X-50X,人類基因組大小約為3G,因此數據量通常在90G-150G左右。這樣的測序深度可以較為***地檢測到基因組中的各種變異,包括單核苷酸多態性(SNP)、插入缺失(Indel)、結構變異(SV)等,適用于大多數疾病研究、群體遺傳學研究以及個體遺傳特征分析等。

高深度全基因組測序:對于一些特殊的研究目的,如檢測低頻變異、體細胞突變等,可能需要更高的測序深度,達到100X甚至更高。此時數據量會相應增加到300G及以上,這種高深度測序能夠更靈敏地發現罕見的遺傳變異,但成本也會大幅提高。 二代測序是先打斷DNA,使其片段化。

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②二代測序一般多久出結果?

2、測序平臺和通量

不同的二代測序平臺有不同的通量(一次能測序的樣本數量和數據量)和測序速度。一些高通量的測序平臺,如IlluminaNovaSeq系列,能夠在較短時間內產生大量的數據。但如果使用的是通量較低的小型測序儀,或者測序儀的運行時間被多個項目分配,都會影響結果產出的時間。例如,在高通量平臺上進行全基因組測序,測序運行時間可能在2-7天左右,具體取決于測序深度等因素。而對于一些小型臺式測序儀進行靶向基因測序,運行時間可能在1-3天。 二代測序需要分析嗎?廣西二代測序原理

二代測序結果怎么分析?黑龍江二代測序運用

二代測序的建庫步驟⑥

六、文庫質量檢測

定量檢測:使用熒光定量PCR(qPCR)或其他核酸定量方法(如Qubit)來確定文庫的濃度。Qubit是一種基于熒光染料與核酸特異性結合的定量方法,它可以準確地測量DNA或RNA的濃度,并且對不同大小的核酸片段有較好的定量準確性。通過定量檢測,可以了解文庫的產量,為后續的測序上樣量提供參考。

片段大小檢測:利用瓊脂糖凝膠電泳或生物分析儀(如Agilent2100Bioanalyzer)來檢測文庫片段大小。瓊脂糖凝膠電泳是一種傳統的方法,通過將文庫樣品在瓊脂糖凝膠中進行電泳,根據DNA片段在電場中的遷移速度來判斷片段大小。生物分析儀則可以提供更精確的片段大小分布和濃度信息,它是基于微流體芯片技術,能夠快速、準確地分析文庫質量。 黑龍江二代測序運用

標簽: 二代測序