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專業的外泌體檢測

來源: 發布時間:2023-03-12

外泌體表面有其特異性標記物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合,即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態完整等優點,但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響,不利于下游實驗,難以***普及。外泌體是大多數細胞分泌的40 - 150nm的膜泡,存在于細胞培養基、血漿、血清、唾液、尿液、羊水和惡性腹水等生物液體中。外泌體檢測可找英瀚斯生物,測序、電鏡、粒徑分析都可做。外泌體存在于人類或動物的各種體液中。專業的外泌體檢測

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外泌體研究界比較家喻戶曉的就是大牛Thery C了,想當年一篇外泌體超速離心提取方法的文章已經是成為了眾多外泌體研究者的“圣經”了(Isolation and Characterization of Exosomes from Cell Culture Supernatants and Biological Fluids,2006)。據不完全統計,大牛Thery C實驗室已發表外泌體相關paper四五十篇,其中大多數為綜述性文章,實驗性文章有約12篇。英瀚斯生物,多年從事科研課題實驗服務工作,經常設計外泌體相關實驗檢測項目,各類外泌體測序、檢測、電鏡等福建靠譜的外泌體檢測外泌體檢測服務(小鼠***成像/藥代動力學/動物造模)技術服務。

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外泌體的主要功能被認為是細胞之間的信息傳遞,了解它帶有的蛋白質和多種RNA上的信息就變得尤其重要。2019年外泌體中標項目中帶有熱門話題miRNA、lncRNA和環狀RNA的項目數量,我們可以看到,外泌體中的miRNA和lncRNA過去研究的是比較多了,例如發表在Hepatology(IF=14.971)上的一篇文章表明肝ai細胞釋放的外泌體miRNA調控巨噬細胞程序性死亡配體1的表達。另一篇文章發現膽管細胞來源的外泌體LncRNA H19促進肝星狀細胞活化和膽汁淤積性肝纖維化。相對的,外泌體中的circRNA研究目前還較少,而circRNA分子自身獨特的穩定性、組織特異性、時序和疾病特異性等,使它很有可能成為外泌體檢測的下一個熱門分子。

 外泌體是一類由細胞分泌的病毒大小的膜狀囊泡,它們攜帶有蛋白質與核酸,調節著胞內的溝通。目前較常用的外泌體提取方法是differential centrifugation (DC)——差速離心法。也有用試劑盒提取外泌體,但效率均不高。聚乙二醇(PEG)用于濃縮和純化病毒已經超過50年,因為外泌體與病毒有著較為相似的生物物理特性,因此作者考慮用聚乙二醇來純化外泌體,并且給出了新的濃縮提純外泌體的方法。是一種直徑約30~100nm的雙層膜囊泡狀結構小體,可由機體內多種細胞如免疫細胞、干細胞、心血管細胞、網織紅細胞外泌體提取,實驗經驗豐富。

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外泌體提取之后利用電鏡來分析其大小和形態,利用流式細胞儀來分析細胞表面標記,通過Western blot和ELISA等方法對蛋白進行分析,或通過qPCR和新一代測序(NGS)來分析RNA。調查發現,在分離exosome時,約有56%的人采用超速離心法,說明這種方法仍是目前的金標準方法。不過這種方法缺點也不少:耗時耗力,往往需要8-30個小時;每次比較多只能處理6個樣品;需要大量的起始材料;產量不高。商業化的exosome提取試劑盒已經上市,更為簡單省事。外泌體提取,超離法是比較常用的外泌體純化手段。專業的外泌體檢測

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外泌體鑒定:雙層囊膜結構是外泌體重要標志之一,但普通光學顯微鏡難以觀察到此種亞顯微結構。而透射電子顯微鏡(Transmissionelectronmicroscope,TEM)分辨率可達0.1~0.2nm,可將被觀察物體放大至數百萬倍,非常適合進行外泌體雙層囊膜超微結構觀測。英瀚斯生物技術團隊擁有豐富的外泌體電鏡樣本處理與鑒定經驗,可為客戶提供高質量外泌體TEM檢測服務,獲得樣本中外泌體典型形態特征圖片。外泌體作為直徑在30-150 nm的細胞外囊泡,***存在于血液、唾液、尿液等多種體液中。在生理和病理條件下專業的外泌體檢測

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