免疫組化實驗注意事項總結：

?本實驗室所用切片一般是石蠟切片。

?烘片：使蠟片水分蒸發，石蠟軟化，組織切片牢固貼在玻片上；烘片至跟烘片前透明度有差異。

?抗原修復時，使片子始終浸沒在修復液中，液體不能干。

?一抗孵育在37度培養箱，濕盒放置1h，省時間和結合效果好，不要超過1h，容易過染。

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?二抗使用：兩個二抗放大信號或一個二抗；若抗體信號強，可不用放大信號，盡量增大信噪比。

?10XDAB在常溫溶解，盡可能現用現配，放于4度儲存時間久了效果不佳。

?復水和脫水時所用的梯度酒精不可混用，要區分開。

?加抗體和顯色液時，都要將片子甩干，在半干半濕的狀態下再加，不然容易造成溶液的二次稀釋。

?整個操作過程中在顯色之前，一定不能干片。 有沒有能做免疫組化的實驗外包公司？效果好一點的。黑龍江做得好的免疫組化實驗

免疫組化技術有哪些應用？

定位和定性是免疫組化比較大的優勢。相比于其他蛋白檢測方法，免疫組化具有定位較直接準確、定性靈敏度高，是定位檢測分析優先方法，尤其對于有些因子的轉位研究十分有用。免疫組織化學的臨床應用主要包括以下幾方面：惡性**的診斷與鑒別定性；確定轉移性惡性**的原發部位；對某類**進行進一步的病理分型；軟組織**診斷；為臨床提供治療方案的選擇；近年來，隨著免疫組織化學技術的發展和各種特異性抗體的出現，使許多疑難**得到了明確診斷。免疫組化在**診斷和鑒別診斷中的實用價值受到了普遍的認可，其在低分化或未分化**的鑒別診斷時，準確率可達50%-75%。

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英瀚斯生物為您整理免疫組化實驗步驟

1、石蠟切片置于65℃烘箱中烘片2h，脫蠟至水，用PBS沖洗三次，每次5min。

2、切片置于EDTA緩沖液中微波修復，中火至沸后斷電，間隔10min低火至沸。

3、自然冷卻后PBS洗3次，每次5min。4、切片放入3%過氧化氫溶液，室溫下孵育10min，以阻斷內源性過氧化物酶。

5、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）。

6、去除BSA液，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織，4℃過夜。

7、PBS洗3次，每次5min。

8、去除PBS液，每張切片加50μl-100μl相應種屬的二抗，4℃孵育50min。

9、PBS洗3次，每次5min。

10、去除PBS液，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液，顯微鏡控制顯色。

11、顯色完全后，蒸餾水或自來水沖洗，蘇木素復染，1%鹽酸酒精分化（1s），自來水沖洗，氨水返藍，流水沖洗。

12、切片經過梯度酒精（70-100%）10min一個梯度，脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。

臨床應用中，藥物靶點免疫組化，英瀚斯生物專業做實驗外包服務，一站式醫學科研平臺。免疫組化及分子病理學方法在疾病診斷中只只起輔助醫療的作用，而藥物病理學是用病理學的方法確定藥物醫療的靶點、評價藥物醫療的療效、預測藥物醫療的反應，因此藥物靶點免疫組化屬“單獨的診斷”。因此對于對照的設置、質量的控制均需要更高的要求，如對試劑的要求，不同于一般的診斷試劑，應按對藥物管理的要求操作。HER2蛋白著色3+者可作為臨床醫生建議患者接受曲妥珠單抗等藥物醫療的依據。英瀚斯生物做免疫組化怎么樣？

細胞屬性的判定，免疫組化也可以進行這方面的臨床應用。通過特定抗體標記出細胞內相應的抗原成分，來判定細胞的屬性，確定cancer的來源。如細胞角蛋白(CK)是上皮性標記，CK陽性提示cancer為上皮源性cancer;降鈣素抗體是甲狀腺髓樣cancer特有的標記;甲狀腺球蛋白(Tg)陽性提示是甲狀腺濾泡性cancer;前列腺特異性抗原(PSA)只見于前列腺上皮;膠質纖維酸性蛋白(GFAP)陽性則提示膠質cancer;CD20和CD79a陽性則提示B細胞淋巴瘤;平滑肌肌動蛋白(Actin)陽性提示cancer為平滑肌源性;胃腸道間質瘤中原cancer基因蛋白產物CD117陽性;血管源性cancer中內皮細胞標記物CD34陽性等等。如果您需要做實驗外包，可以與我們英瀚斯生物進行聯系。英瀚斯生物為您詳解免疫組化實驗指南！云南細胞免疫組化哪家好

免疫組化方法步驟是什么？黑龍江做得好的免疫組化實驗

實驗失敗常見問題分析有哪些：

為什么在顯微鏡下觀察發現所有的切片都成陰性？

答：這種現象主要是由操作不當導致，可能的原因有：1.染色操作不當，致使染色失敗；2.漏加一種抗體或者制備出的抗體沒有活性；3.緩沖液中有疊氮化鈉，抑制了酶的活性；4.復染或脫水劑使用不當等。建議逐一排查，找到原因后重新進行實驗。

在顯微鏡下觀察發現所有的切片都成陽性，這是為什么？答：與上一個問題類似，出現的原因也是試驗操作存在問題，可能的原因有：1.切片在染色過程中抗體過濃，或者干片了；使用的呈色底物溶液已變色或呈色反應時間過長；3.抗體溫育的時間過長等。

在顯微鏡下觀察發現切片的背景很深，這是為什么？答：以下幾方面會導致切片的背景過深：1.蛋白質封閉不夠或所用血清溶血，造成抗體的非特異性反應；2.內源性過氧化酶沒有完全阻斷，顯色過程中過氧化酶與酶底物反應，造成背景；3.底物呈色反應時間過長或呈色反應后漂洗不徹底。 黑龍江做得好的免疫組化實驗

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