外泌體為細胞療法中的不同合成分子和生物分子的遞送提供了廣闊的前景和嶄新的診療領域。外泌體還顯示出了在診療各種疾病(如心肌病和神經病)方面的潛力。但是,在實際應用外泌體之前,需要使用大型動物模型進行進一步研究和臨床試驗。同時需要開發大規模生產質量可控的外泌體并快速純化外泌體的技術和策略。另外,在研究和評估外泌體的副作用和功效時,必須考慮到肉瘤細胞來源的外泌體可能增強肉瘤生長的潛在風險。外泌體給藥途徑:給藥途徑是獲得所需功效的重要參數。外泌體可以通過多種方法給藥,但是,靜脈內給藥是較常用的途徑。通過利用增強通透性和保留(EPR)效應,在荷瘤動物中靜脈內遞送外來體似乎是有用的。在某些容易達到肉瘤部位的不同惡性肉瘤中,外泌體療法的給藥途徑是瘤內注射。在疾病部位直接注射外泌體的優點是可以特異性地運送裝載的藥物。另外口服給藥,腹腔給藥,皮內給藥和鼻內給藥途徑已成功用于外泌體遞送。超速離心法,這是目前外泌體提取較常用的方法。腦脊液外泌體lncRNA芯片
外泌體生物學功能:1、在心血管系統中,據報道,源自人胚胎干細胞(ESC)的間充質干細胞(MSC)外泌體可減少小鼠和豬模型中的心肌缺血和再灌注損傷;2、在免疫系統中,據報道趨化因子受體CCR5通過外泌體在細胞之間轉移是細胞人類免疫缺陷病毒傳染的一種機制;3、在中樞的神經系統(CNS)中,外泌體的作用是消除廢物并介導大腦活動,從而阻止神經退行性疾病的發病機理;迄今為止,尚未完全發現調節外泌體-細胞結合的途徑。然而,比較明顯,其結合過程從外泌體識別受體細胞PM上的特定受體開始。膜受體的識別是外泌體細胞反應的基礎,它可能活躍受體并隨后導致相關信號通路的活躍,外泌體與PM融合或外泌體的內吞作用,從而導致蛋白質和RNA直接釋放到受體細胞中。外泌體藥物外泌體產生于細胞中的多泡體。
AFC自動收集器是將qEV分離法這一過程自動化的儀器,將用來收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉盤內,根據稱重精確測量流體體積,可精確的測量到樣品中每一個液滴的重量并精確測量總重量。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉盤的單獨中心孔中并送至廢液桶,避免將不需要的空隙部分收集到微量離心管中。在提取期間,當達到設定的提取體積后,轉盤會自動旋轉到下一個微量離心管繼續收集,到收集完成后自動停止。微滴式數字PCR技術不佳有效提高了核酸分子的擴增效率,而且由于采用微滴計數的方法進行定量,可以不依賴與RT-PCR的熒光信號和Ct值,對所測樣品中的核酸分子進行一定定量。
外泌體的來源與特征:外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體,通過細胞內吞泡膜向內凹陷形成,其大小均一,直徑為40-100nm,密度為1.10-1.18g/mL。外泌體可由間充質干細胞、淋巴細胞和腫細胞細胞等多種類型細胞主動分泌釋放。外泌體內主要含有核酸、蛋白質和脂質等,可作為疾病診斷標記物、調控靶細胞功能、參與細胞生物學活動等。例如:含有miR-140-5p的滑膜間充質干細胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生;骨髓間充質干細胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調節成骨細胞分化促進大鼠顱骨缺損的骨再生。外泌體作為核酸的藥物遞送載體。外泌體膜可以與靶細胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質、mRNA以及microRNA。
外泌體的納米球膜型結構由雙層脂質形成。它也由各種類型的脂質和蛋白質組成,這些脂質和蛋白質衍生自形成外泌體的親代細胞。根據外泌體數據庫ExoCarta的資料,目前已知約有8000種蛋白質和194種脂質與外泌體相關。外泌體通過生物體液被多種不同類型的細胞分泌,包括滑膜液,母乳,血液,尿液,唾液,羊水和血液中的血清,這表明它們在細胞間通訊和觸發生理反應中起著重要的作用。外泌體功能在研究初期階段發現是參與細胞成熟過程中去除不必要的蛋白質。簡而言之,它們是天然膜囊泡,將蛋白質,RNA,DNA和脂質從一個細胞攜帶到另一個細胞,從而調節受體細胞的生物功能。免疫印跡或蛋白質印跡是分析外泌體較常用的方法之一,其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結合。細菌提取試劑盒銷售
外泌體的存在:外泌體幾乎存在于所有的組織、細胞間隙、體液中。腦脊液外泌體lncRNA芯片
常規生物學實驗中,實時定量PCR技術(RT-PCR)普遍用于microRNA的檢測實踐中,但外泌體樣品中的microRNA豐度極低,普通RT-PCR技術的靈敏度已經不能夠滿足。第三代微滴式數字PCR——ddPCR技術,成為外泌體microRNA檢測的選擇技術。微滴式數字PCR(DropletdigitalPCR),又成為“油包水PCR”,在傳統的PCR擴增前對樣品進行微滴化處理,即將含有核酸分子的反應體系分成成千上萬個納升級的微滴,其中每個微滴或不含待檢核酸靶分子,或者含有一個至數個待檢核酸靶分子。經PCR擴增后,逐個對每個微滴進行檢測,有熒光信號的微滴判讀為1,沒有熒光信號的微滴判讀為0,根據泊松分布原理及陽性微滴的個數與比例即可得出靶分子的起始拷貝數或濃度。腦脊液外泌體lncRNA芯片
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