外泌體的提取、純化和鑒定：每一個外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。另外利用外泌體自身的物理化學性質所研發(fā)的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學（電子顯微鏡技術）、粒子大小以及標志蛋白等方式實現(xiàn)的。近來的研究發(fā)現(xiàn)外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用，如免疫中抗原呈遞、瘤子的生長與遷移、組織損傷的修復等。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標志物。外泌體具有脂質雙層膜結構，能比較好的保護其包被的物質，且能靶向特定細胞或組織，因此是一種比較好靶向給藥系統(tǒng)。腹水外泌體融合實驗外泌體的膜蛋白有可能與細胞膜蛋白作用，活躍細胞內通路。外泌體存在于組織樣本中，如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。泌康霧化液外泌體

外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白，是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調節(jié)外泌體膜與受體細胞的融合，有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)在早期以及回收的核內體中，RAB7和RAB9主要出現(xiàn)在晚期的核內體。現(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白，外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白（包括膜聯(lián)蛋白1、2、4、5、6、7、11等）。外泌體膜上富含參與外泌體運輸的四跨膜蛋白家族（CD63,CD81和CD9)）、熱休克蛋白家族（(HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33（結腸上皮細胞來源）、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素（不成熟的樹突狀細胞）。外泌體的提取的方式：超速離心法。乳液提取試劑盒服務免疫印跡或蛋白質印跡是分析外泌體較常用的方法之一，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結合。

尺寸排阻色譜法（SEC）根據大小來分離樣本。該技術應用了一個裝有多孔聚合物珠的色譜柱，該聚合物珠包含多個孔和通道，分子根據其直徑穿過。半徑小的分子穿過柱子的孔遷移需要較長的時間，而大分子則較早地從柱子上洗脫下來。SEC可精確分離大分子和小分子。與離心分離方法相比，SEC分離的外泌體不受剪切力的影響，剪切力可能會改變囊泡的結構。此方法分離到的外泌體純度較高，在電鏡下大小均一，但是獲取量少，所需設備特殊。此外，SEC方法與超濾相結合已被用于尿液來源的外泌體的分離和分析。

外泌體的提取分離方法：1、超濾離心：由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體，大于一般蛋白質，利用不同截留相對分子質量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離，便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效，且不影響外泌體的生物活性，是提取細胞外泌體的一種新方法。2、磁珠免疫法：外泌體表面有其特異性標記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態(tài)完整等優(yōu)點，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗，難以普遍普及。需要開發(fā)大規(guī)模生產質量可控的外泌體并快速純化外泌體的技術和策略。

外泌體是分泌的細胞外囊泡的主要群體，是具有生物活性的脂雙層囊泡，大小約為30-100nm，由不同類型的正常細胞和瘤子細胞自然產生和釋放。這些囊泡在細胞間通訊中起重要作用，并影響細胞外環(huán)境和免疫系統(tǒng)反應。外泌體通過內體途徑分泌到細胞外空間，并將各種生物活性分子（貨物）轉運至靶細胞。外泌體貨物的組成非常多樣化，包括各種免疫阻止和免疫刺激蛋白、趨化因子、細胞因子、細胞受體、脂質以及不同的核酸，如miRNA和環(huán)狀RNA。外泌體可以通過多種方法給藥，靜脈內給藥是較常用的途徑。外泌體的直徑比微泡的要小，后者直徑為100nm-1μm。成都外泌體label free

對外泌體的分析和檢測可以輔助疾病的早期診斷、療效評價和預后分析。泌康霧化液外泌體

酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）：將其中一種針對外泌體表面抗原的抗體固定在微孔板的表面上，將外泌體樣品暴露于含有固定抗體的孔中，由于抗體-抗原相互作用，表達抗原的外泌體將被捕獲固定在板上。將未捕獲的樣品內容物洗掉，并使用另一種抗體檢測固定的外泌體。ELISA已用于從尿液、血漿和血清中分離出外泌體，當使用標準液（已知外泌體的量）創(chuàng)建標準曲線時，甚至可以進行定量。但是，此方法需要通過超速離心或超濾對樣品進行預處理。同樣，流場-流分離與紫外線分析儀和光散射檢測器相結合已被用于分析外泌體的大小和純度。泌康霧化液外泌體

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