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血液外泌體蛋白質組學

來源: 發布時間:2023-03-14

外泌體的納米球膜型結構由雙層脂質形成。它也由各種類型的脂質和蛋白質組成,這些脂質和蛋白質衍生自形成外泌體的親代細胞。根據外泌體數據庫ExoCarta的資料,目前已知約有8000種蛋白質和194種脂質與外泌體相關。外泌體通過生物體液被多種不同類型的細胞分泌,包括滑膜液,母乳,血液,尿液,唾液,羊水和血液中的血清,這表明它們在細胞間通訊和觸發生理反應中起著重要的作用。外泌體功能在研究初期階段發現是參與細胞成熟過程中去除不必要的蛋白質。簡而言之,它們是天然膜囊泡,將蛋白質,RNA,DNA和脂質從一個細胞攜帶到另一個細胞,調節受體細胞的生物功能。外泌體作為蛋白質的藥物遞送載體。血液外泌體蛋白質組學

血液外泌體蛋白質組學,外泌體提取試劑盒

外泌體攜帶大量特異性的蛋白質(如細胞因子、生長因子)以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質,在體內參與細胞通訊、細胞遷移、促血管新生和抗瘤子免疫等生理過程,與多種疾病的發生和進程密切相關。由于外泌體的特殊結構和功能,使得它具有潛在的應用價值,一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標,另一方面也可以作為診療手段,未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療。外泌體研究,應選用血漿還是血清?答:血清是血液凝固之后收集的液體,所以其中少了纖維蛋白原,凝血因子,以及多了比較多凝血產物。纖維蛋白原可轉化為纖維蛋白,具有凝血功能。在凝血過程中血小板會分泌大量的外泌體,有研究發現血清中有接近50%的外泌體來自額外的分泌。植物外泌體脂質組學一個推測的作用是外泌體可能從細胞中去除多余和/或不必要的成分以維持細胞內環境的穩定。

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外泌體的提取分離方法:1、PEG-base沉淀法:聚乙二醇可與疏水性蛋白和脂質分子結合共沉淀,早先應用于從血清等樣本中收集病毒,現在也被用來沉淀外泌體,其原理可能與競爭性結合游離水分子有關。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題:比如純度和回收率低,雜蛋白較多(假陽性),顆粒大小不均一,產生難以去除的聚合物,機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等,因此發表文章時易受質疑。2、試劑盒提取:近幾年來,市場上已出現各種商業化的外泌體提取試劑盒,有的是通過特殊設計的過濾器過濾掉雜質成分,有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進行分離純化,也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式:1、免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態的完整,特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,不便進行下一步的實驗。2、PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態完整,純度較高。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細胞共培養和體內注射。3、色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不普遍。近年來,隨著外泌體研究的不斷深入,它的應用已經涉及醫學基礎和免疫領域、寄生蟲領域。

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外泌體提取在短時間(一周之內)使用,可以放在4度保存,如果長時間保存可以放在-20度或-80度保存。也可以將外泌體進行分裝,分別放在-20度或-80度。外泌體檢測方法:外泌體分離之后,需要經過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標志物,多角度進行鑒定。l、透射電鏡鑒定法:簡稱TEM,適合外泌體雙層囊膜超微結構觀察,即通常為茶托型或一側凹陷的半球形。2、納米顆粒追蹤分析法:簡稱NTA,該方法能保證外泌體原始狀態、檢測速度快,檢測后能提供外泌體粒徑和濃度信息。外泌體的提取的方式:PS親和法。杭州胸水外泌體

外泌體發揮功能:將細胞或組織中多余的或者有害的分子排除,這為研究生物標志物提供了可能。血液外泌體蛋白質組學

外泌體是細胞分泌到胞外的一種囊泡,其大小為30-150nm,具有雙層膜結構和茶托狀形態,含有豐富的內含物(包括核酸、蛋白和脂質等),參與細胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細胞培養上清以及各種體液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等,同時也存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。所有的細胞都能分泌外泌體,但是不同細胞分泌的外泌體不管在數量上還是在內含物中都具有比較大的差異性,這也決定了每種外泌體所行使的功能不一樣。外泌體普遍參與細胞間物質運輸與信息傳遞,調控細胞生理活動。同時,外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導正常細胞轉化、促進瘤子發生和轉移等作用;此外,外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進行藥物遞送。外泌體的膜蛋白有可能與細胞膜蛋白作用,活躍細胞內通路。血液外泌體蛋白質組學

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