外泌體的納米球膜型結構由雙層脂質形成。它也由各種類型的脂質和蛋白質組成，這些脂質和蛋白質衍生自形成外泌體的親代細胞。根據外泌體數據庫ExoCarta的資料，目前已知約有8000種蛋白質和194種脂質與外泌體相關。外泌體通過生物體液被多種不同類型的細胞分泌，包括滑膜液，母乳，血液，尿液，唾液，羊水和血液中的血清，這表明它們在細胞間通訊和觸發生理反應中起著重要的作用。外泌體功能在研究初期階段發現是參與細胞成熟過程中去除不必要的蛋白質。簡而言之，它們是天然膜囊泡，將蛋白質，RNA，DNA和脂質從一個細胞攜帶到另一個細胞，調節受體細胞的生物功能。利用外泌體自身的物理化學性質所研發的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果。體液外泌體iTRAQ

AFC自動收集器是將qEV分離法這一過程自動化的儀器，將用來收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉盤內，根據稱重精確測量流體體積，可精確的測量到樣品中每一個液滴的重量并精確測量總重量。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉盤的單獨中心孔中并送至廢液桶，避免將不需要的空隙部分收集到微量離心管中。在提取期間，當達到設定的提取體積后，轉盤會自動旋轉到下一個微量離心管繼續收集，到收集完成后自動停止。微滴式數字PCR技術不佳有效提高了核酸分子的擴增效率，而且由于采用微滴計數的方法進行定量，可以不依賴與RT-PCR的熒光信號和Ct值，對所測樣品中的核酸分子進行一定定量。從研究上來講并不太嚴格區分外泌體或微泡。腹水外泌體label free提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態學（電子顯微鏡技術）、粒子大小以及標志蛋白等方式實現的。

外泌體攜帶大量特異性的蛋白質（如細胞因子、生長因子）以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質，在體內參與細胞通訊、細胞遷移、促血管新生和抗瘤子免疫等生理過程，與多種疾病的發生和進程密切相關。由于外泌體的特殊結構和功能，使得它具有潛在的應用價值，一方面可以作為診斷多種疾病的生物指標，另一方面也可以作為診療手段，未來有可能作為藥物的天然載體用于臨床診療。外泌體研究，應選用血漿還是血清？答：血清是血液凝固之后收集的液體，所以其中少了纖維蛋白原，凝血因子，以及多了比較多凝血產物。纖維蛋白原可轉化為纖維蛋白，具有凝血功能。在凝血過程中血小板會分泌大量的外泌體，有研究發現血清中有接近50%的外泌體來自額外的分泌。

外泌體的提取分離方法：1、超濾離心：由于外泌體是一個大小約幾十納米的囊狀小體，大于一般蛋白質，利用不同截留相對分子質量(MWCO)的超濾膜對樣品進行選擇性分離，便可獲得外泌體。超濾離心法簡單高效，且不影響外泌體的生物活性，是提取細胞外泌體的一種新方法。2、磁珠免疫法：外泌體表面有其特異性標記物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合，即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態完整等優點，但是效率低，外泌體生物活性易受pH和鹽濃度影響，不利于下游實驗，難以普遍普及。外泌體產生于細胞中的多泡體。

外泌體的提取、純化和鑒定：每一個外泌體研究者較初都要為外泌體的分離提取而煩惱。選擇的分離方式是利用超速離心的方式分離外泌體，并且可以選用梯度密度離心法得到純度更高的外泌體。另外利用外泌體自身的物理化學性質所研發的各種市售的外泌體分離提取試劑盒也能達到分離效果。提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態學（電子顯微鏡技術）、粒子大小以及標志蛋白等方式實現的。近來的研究發現外泌體在比較多生理病理上起著重要的作用，如免疫中抗原呈遞、瘤子的生長與遷移、組織損傷的修復等。不同細胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能，可作為疾病診斷的生物標志物。外泌體具有脂質雙層膜結構，能比較好的保護其包被的物質，且能靶向特定細胞或組織，因此是一種比較好靶向給藥系統。近年來，隨著外泌體研究的不斷深入，它的應用已經涉及醫學基礎和免疫領域、寄生蟲領域。外泌體作用

外泌體中含有核酸，包括miRNA、DNA、lncRNA、mRNA。體液外泌體iTRAQ

外泌體的提取分離方法：1、PEG-base沉淀法：聚乙二醇可與疏水性蛋白和脂質分子結合共沉淀，早先應用于從血清等樣本中收集病毒，現在也被用來沉淀外泌體，其原理可能與競爭性結合游離水分子有關。利用PEG沉淀外泌體存在不少問題：比如純度和回收率低，雜蛋白較多（假陽性），顆粒大小不均一，產生難以去除的聚合物，機械力或者吐溫-20等化學添加物將會破壞外泌體等，因此發表文章時易受質疑。2、試劑盒提取：近幾年來，市場上已出現各種商業化的外泌體提取試劑盒，有的是通過特殊設計的過濾器過濾掉雜質成分，有的則采用空間排阻色譜法(SEC)進行分離純化，也有的則利用化合物沉淀將法外泌體沉淀出來。體液外泌體iTRAQ

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