外泌體的基本信息:1、外泌體的大小:外泌體的直徑約40-150nm。2、從研究上來講并不太嚴格區分外泌體或微泡。3、外泌體屬于胞外囊泡類,除了外泌體之外細胞還分泌微泡以及其它的膜囊泡。4、外泌體的直接比微泡的要小,后者直徑為100nm-1μm。5、外泌體的數量:人體中大約有1014個,近乎于平均每個細胞產生1000-10000個。6、外泌體的細胞源:人體中幾乎所有類型的細胞均能產生外泌體。7、外泌體具有異質性,即使是同一種細胞分泌的外泌體都有可能具有比較大功能區別。8、外泌體的存在:外泌體幾乎存在于所有的組織、細胞間隙、體液中。9、外泌體產生于細胞中的多泡體。外泌體內主要含有核酸、蛋白質和脂質等,可作為疾病診斷標記物、調控靶細胞功能、參與細胞生物學活動等。唾液外泌體提取
PEG沉淀法分離外泌體:通常通過將無水聚合物,如聚乙二醇(PEG),與樣品混合來沉淀外泌體。PEG聚合物競爭性結合水分子,增加疏水性蛋白和脂質分子的相互結合力從而沉淀外泌體,然后通過離心分離外泌體。這種分離的方法快速,簡便,可用于各種起始體積(從100μL到幾毫升)適合于各種研究和臨床設定。然而,這種方法缺乏選擇性,PEG聚合物不只會導致外泌體小泡沉淀,還會引起其他細胞外囊泡、細胞外蛋白質和蛋白質聚集體沉淀。因此,在使用這種方法之前,必須進行樣品預處理,例如過濾或超速離心,以減少較終的外泌體制劑的污染。外泌體的品牌有哪些外泌體的提取分離方法:PEG-base沉淀法。
磁珠免疫法分離外泌體:將針對目的抗原的抗體通過生物素-鏈霉親和素連接到磁珠表面,然后將磁珠與樣品共孵育,使外泌體特異性結合到磁珠上形成磁珠-外泌體復合物,再用蒸餾水或者PBS沖洗,結尾用甘氨酸-Tris-HCl溶液洗脫獲得外泌體。該方法相對于ELISA的好處主要是,珠粒提供了更大的表面積來捕獲外泌體,從而提高了分離效率。此外,使用磁珠時,樣品起始體積沒有上限,而基于微孔板的ELISA分析的較大樣品體積為100μL,且ELISA洗脫雜質時容易造成孔間交叉污染。當將磁珠法與金標準外泌體分離方法進行比較時,磁珠法可分離出更純凈的外泌體,特異性高、速度更快,并且不需要昂貴的儀器。另外,與其他分離方法(如超速離心或超濾)相比,磁珠法不影響外泌體形態。但是采用磁珠法時,外泌體生物活性易受PH和鹽濃度影響。
ELISA與WB的原理一樣,在抗體包被的微孔板中加入待測樣品、封閉、一抗孵育,洗滌后加入酶標待測物形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,徹底洗滌后加顯色劑并用酶標儀測定吸光值,結尾用標準曲線計算外泌體表達量。ELISA能實現對外泌體特異性蛋白的定量。其他外泌體鑒定方法還有微流體測定法和外泌體蛋白質組學分析等。由于外泌體在各種生命過程中的重要作用及其作為疾病生物標志物和藥物輸送系統的潛力,人們對此領域的興趣越來越高。盡管目前在技術上取得了長足的進步,但尚未建立對外泌體進行準確和標準化鑒定以及定量的方法,關于外泌體的量應由囊泡顆粒的數量、囊泡蛋白的量或囊泡數與蛋白之比來定義仍存在比較多爭論。建立外泌體分離、表征以及效價測定的標準化方法將是外泌體作為診斷和診療用途之前需要解決的問題。外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。
外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調節外泌體膜與受體細胞的融合,有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現在早期以及回收的核內體中,RAB7和RAB9主要出現在晚期的核內體。現有大量的研究發現外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯蛋白(包括膜聯蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌體膜上富含參與外泌體運輸的四跨膜蛋白家族(CD63,CD81和CD9))、熱休克蛋白家族((HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33(結腸上皮細胞來源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素(不成熟的樹突狀細胞)。隨著外泌體研究的不斷深入,它的應用已經涉及醫學基礎和免疫領域、寄生蟲領域。外泌體的品牌有哪些
外泌體普遍參與細胞間物質運輸與信息傳遞,調控細胞生理活動。唾液外泌體提取
外泌體的納米球膜型結構由雙層脂質形成。它也由各種類型的脂質和蛋白質組成,這些脂質和蛋白質衍生自形成外泌體的親代細胞。根據外泌體數據庫ExoCarta的資料,目前已知約有8000種蛋白質和194種脂質與外泌體相關。外泌體通過生物體液被多種不同類型的細胞分泌,包括滑膜液,母乳,血液,尿液,唾液,羊水和血液中的血清,這表明它們在細胞間通訊和觸發生理反應中起著重要的作用。外泌體功能在研究初期階段發現是參與細胞成熟過程中去除不必要的蛋白質。簡而言之,它們是天然膜囊泡,將蛋白質,RNA,DNA和脂質從一個細胞攜帶到另一個細胞,調節受體細胞的生物功能。唾液外泌體提取
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