外泌體遞送藥物的優勢:許多新的候選藥物(例如蛋白質和核酸)在體內環境中高度不穩定,對診療結果的效果提出了重大挑戰。鑒于與許多當前的納米微粒遞送系統相關的問題,外泌體作為“自然的遞送系統”允許遞送這些生物分子。由于外泌體體積小和其本身就是細胞產物,通過外泌體遞送藥物可以避免巨噬細胞的吞噬作用或降解,還可以在體內長時間循環,保持效果。其中,外泌體能夠穿過血腦屏障以將特定藥物輸送到中樞的神經系統是外泌體遞送藥物的一個明顯優勢。外泌體膜中有跨膜蛋白PGRL、LAMP1、LAMP2。活內的外泌體動態(哪個外泌體遷移至何處)也會成為今后需要努力研究的重要課題。腦脊液外泌體提取
外泌體的來源與特征:外泌體是一種存在于細胞外的多囊泡體,通過細胞內吞泡膜向內凹陷形成,其大小均一,直徑為40-100nm,密度為1.10-1.18g/mL。外泌體可由間充質干細胞、淋巴細胞和腫細胞細胞等多種類型細胞主動分泌釋放。外泌體內主要含有核酸、蛋白質和脂質等,可作為疾病診斷標記物、調控靶細胞功能、參與細胞生物學活動等。例如:含有miR-140-5p的滑膜間充質干細胞來源外泌體(SMSC-Exo影響軟骨組織再生;骨髓間充質干細胞來源外泌體攜帶的miR-196a可調節成骨細胞分化促進大鼠顱骨缺損的骨再生。外泌體顯示出了在診療各種疾病(如心肌病和神經病)方面的潛力。提取試劑盒價錢膜受體的識別是外泌體細胞反應的基礎,它可能活躍受體并隨后導致相關信號通路的活躍。
免疫印跡或蛋白質印跡是分析外泌體較常用的方法之一,其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結合。首先對樣品進行處理將囊泡裂解并將蛋白質變性,變性后,通過SDS-PAGE分離蛋白質,然后將其轉移到硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上并暴露于針對目的抗原的抗體中。抗體特異性識別膜表面上的抗原,然后將膜暴露于第二抗體中。通過二抗的熒光標簽或與二抗偶聯的辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶基團進行檢測。常用的標記蛋白為CD63、CD81、TSG101和ALIX等。但是此方法的特異性和重復性會受到所用抗體質量的限制。外泌體的直徑比微泡的要小,后者直徑為100nm-1μm。
外泌體在神經系統中與神經回路的控制相關,同時各種神經退行性疾病的致病蛋白還可以通過外泌體釋放到細胞外并傳遞到其他細胞,與病情發展密切相關。病細胞釋放的外泌體含有許多與血管新生和免疫逃逸相關的分子,構建適合病細胞生長的微環境,促進病細胞的發展。另外,病細胞來源的外泌體上粘著分子的表達形式決定著癥狀向身體部位的轉移途徑。近,有報告指出脂肪細胞釋放的外泌體對肝臟的遺傳基因表達有控制作用。許多病毒利用外泌體的產生路徑傳播細胞,受病毒傳播的細菌和寄生蟲通過外泌體控制其他受細胞傳播的細菌、寄生蟲的活動。外泌體并作為癥狀早期診斷技術,應用于與癥狀進展相關的研究。
外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。它可以調節外泌體膜與受體細胞的融合,有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現在早期以及回收的核內體中,RAB7和RAB9主要出現在晚期的核內體。現有大量的研究發現外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯蛋白(包括膜聯蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌體膜上富含參與外泌體運輸的四跨膜蛋白家族(CD63,CD81和CD9))、熱休克蛋白家族((HSP60,HSP70,HSPA5,CCT2和HSP90以及一些細胞特異性的蛋白包括A33(結腸上皮細胞來源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素(不成熟的樹突狀細胞)。外泌體發揮功能:將細胞或組織中多余的或者有害的分子排除,這為研究生物標志物提供了可能。外泌體提純方法中,超速離心法和聚合物沉淀法(市售試劑盒)混入多種雜質。外泌體提取試劑盒品牌
外泌體是各種細胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡。腦脊液外泌體提取
在Rameshwar等的研究中,采用轉染間充質干細胞的方法,使外泌體載有anti-miR-9。在進行間充質細胞和多形性成角質細胞瘤(GBM)細胞間anti-miR-9傳遞的實驗時,發現兩種細胞不僅可以通過縫隙連接介導的細胞間通訊(GJIC)也可以通過外泌體傳遞anti-miR-9。且anti-miR-9降低兩種GBM細胞(U87和T98G)對中流藥物替莫唑胺(TMZ)的抵抗能力的功能主要由外泌體傳遞的anti-miR-9實現,而非經GJIC傳遞的anti-miR-9,顯示出外泌體在運載miRNA進行基因zhiliao時的潛力。利用外泌體進行GBM的zhiliao不只停留在體外細胞實驗上,也已經有相關的體內zhiliao報道。腦脊液外泌體提取
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