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胸水外泌體脂質組學

來源: 發布時間:2023-05-11

免疫印跡或蛋白質印跡是分析外泌體較常用的方法之一,其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結合。首先對樣品進行處理將囊泡裂解并將蛋白質變性,變性后,通過SDS-PAGE分離蛋白質,然后將其轉移到硝酸纖維素膜或聚偏二氟乙烯(PVDF)膜上并暴露于針對目的抗原的抗體中。抗體特異性識別膜表面上的抗原,然后將膜暴露于第二抗體中。通過二抗的熒光標簽或與二抗偶聯的辣根過氧化物酶或堿性磷酸酶基團進行檢測。常用的標記蛋白為CD63、CD81、TSG101和ALIX等。但是此方法的特異性和重復性會受到所用抗體質量的限制。外泌體的直徑比微泡的要小,后者直徑為100nm-1μm。外泌體不只可作為疾病診斷的生物標志,而且可作為天然的藥物傳遞載體。胸水外泌體脂質組學

胸水外泌體脂質組學,外泌體提取試劑盒

被特定部位的細胞獲取的瘤子外泌體可為腫細胞的轉移準備轉移前微環境。用肺轉傾向的腫細胞細胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉傾向的腫細胞細胞重新定向。外泌體的蛋白質組學分析發現不同部位傾向性的腫細胞細胞來源的外泌體具有不同的整合素(integrin)表達譜,整合素α6β4和α6β1與肺轉有關,而整合素αvβ5與肝轉有關。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細胞獲取,進而分別降低了肺和肝的轉移。進一步研究發現外泌體整合素被細胞獲取后活躍了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達。通過臨床數據分析顯示外泌體整合素可作為預測腫細胞轉移的部位傾向性的診斷指標。外泌體的提取的方式:PS親和法。外泌體的提取外泌體是細胞在特定條件下分泌的小囊泡,是細胞間傳遞信號,相互溝通和影響的重要工具。

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Exosome,中文名外泌體,是一種能被大多數細胞分泌的微小膜泡,具有脂質雙層膜結構,直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發現,但人們一直認為它只是一種細胞的廢棄物。然而較近幾年,人們發現這種微小膜泡中含有細胞特異的蛋白、脂質和核酸,能作為信號分子傳遞給其他細胞從而改變其他細胞的功能。這些發現點燃了人們對細胞分泌膜泡的興趣。2015年,隨著精確醫學概念的提出,越來越多的人開始關注如何能做到疾病的精確診斷和診療。外泌體作為一個新型的研究熱點,由于它在體內存在的普遍性和獲取的便捷性,已經成為了疾病診斷診療的潛在有效方式,在精確醫學發展上有著光明的前景。

外泌體中包含的mRNAs和miRNAs在進入受體細胞后仍具有翻譯蛋白質、促進病毒感ran等功能。據估計,單個外泌體含有約≤100拷貝數的蛋白質和≤10000拷貝數的核苷酸。不同細胞來源的外泌體中既包含與細胞形成、結構和物質轉運相關的共有成分,也包含與來源細胞的生物功能相關的特異分子。如B淋巴細胞、樹突狀細胞、肥大細胞和腸上皮細胞來源的外泌體含有大量的主要組織相容性復合體蛋白質MHCclassⅡ和MHCclassⅠ,血小板和T細胞來源的外泌體則包含諸如血管性血友病因子、穿孔素和顆粒酶等特殊蛋白質,而ai細胞來源的外泌體表面可能含有中流特異的蛋白質分子。這類特異分子在外泌體介導細胞信號轉導、參與生理病理過程中發揮至關重要的作用。外泌體其純度與超離心法和PEG沉淀法提取外泌體做比較。

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外泌體是由細胞細胞質內的晚期內泡小體以膜融合的方式通過胞吐方式主動分泌到細胞外環境的一種直徑30-100nm的微型囊泡,其形態規則,呈圓形或橢圓形杯狀結構,不同類型細胞分泌的外泌體具有很多共性,包括膜上富含脂筏及豐富的跨膜蛋白,如四次跨膜蛋白家族成員CD63、CD81等,表面為類似于細胞膜的脂質雙分子層,具有一定的疏水性。外泌體能夠攜帶微小RNA(microRNAs,miRNAs)、RNA、蛋白質等生物活性分子,并在細胞外環境穩定存在,而且通過傳遞供體細胞信息,調節靶細胞的代謝通路。外泌體可由多種類型細胞分泌,妊娠期母體血清中存在表達胎盤堿性磷酸酶(placentalalkalinephosphatase,)的胎盤來源外泌體,并且在妊娠中發揮重要的作用。外泌體是具有生物活性的脂雙層囊泡。廣州外泌體miRNA測序

外泌體的膜同細胞一樣,是磷脂雙分子層。胸水外泌體脂質組學

密度梯度離心是基于差速超高速離心的改良技術。該方法需預先利用常用的梯度液介質如蔗糖、碘克沙醇和氯化銫等,在離心管中構筑從底部到頂部密度逐漸降低的密度梯度帶。根據密度梯度構建和沉降方式的不同,又可以分為速率區帶離心法和等密度梯度離心法,前者主要根據顆粒的沉降速率分離,介質密度均小于外泌體密度,離心時樣品在向超速離心管底部移動時,會通過密度不斷增加的密度梯度區帶,密度大的顆粒更容易穿過密度更高的梯度層,更快地到達管底,因此控制離心的時間很重要;等密度梯度離心法中的密度梯度區帶,則會根據樣品液中各種溶質成分來進行組合,離心過程中,無論離心時間多久,不同密度顆粒jin會富集到具有相同密度的梯度區帶,而不會沉淀到底部。胸水外泌體脂質組學

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