外泌體的提取方法:免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態的完整,特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備,但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性,不便進行下一步的實驗。PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態完整,純度較高。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細胞共培養和體內注射。PS法可提取相當高純度的外泌體。色譜法,這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一,但是需要特殊的設備,應用不寬泛。科學家也嘗試利用外泌體的壓制發病機制功能。血清外泌體lncRNA測序
姜黃素的臨床應用也存在著問題,比如其水溶性差,在體內代謝快速以及易被快速清chu。利用鼠淋巴瘤細胞系(EL-4)的外泌體作為姜黃素的載體,可以提高姜黃素的溶解性、穩定性以及生物利用度,將姜黃素和載有姜黃素的外泌體腹膜內注射到脂多糖(LPS)誘發的敗血性休克的小鼠模型中,結果顯示經外泌體運載的姜黃素可促進小鼠肺部抑制免疫反應的CD11b+Gr-1+細胞的凋亡而表現出抗yan癥的效果,而單純姜黃素的注射不能起到促進CD11b+Gr-1+細胞的凋亡效果(與注射PBS的對照組類似)。研究者還進行了目前常用的脂質體負載姜黃素,與外泌體負載姜黃素對比。脂質體和外泌體均具備作為姜黃素的載體的能力,但外泌體由于其更易被Gr-1+細胞吞噬,從而可以起到更好的zhiliao效果。血漿外泌體iTRAQ干細胞外泌體可以有效活化提高細胞能量加速細胞排毒、淡化色斑。
中流細胞分泌的外泌體可以通過體液進入特定qi官,建立有利于ai細胞生長的微環境,包括促進受體細胞上皮細胞-間充質轉化、引發炎癥、促進血管生成,為ai細胞的擴散形成有利條件。進一步研究發現中流細胞外泌體能夠引導ai癥轉移至特定qi官,在膜表面特異性整合素的作用下,中流細胞外泌體首先在特定的qi官累積,引起受體qi官產生炎癥、生成血管,形成有利于中流轉移的微環境,使得中流細胞更容易轉移至該qi官。Maji等揭示了惡性中流細胞外泌體中的AnnexinⅡ蛋白能夠促進血管生成,為中流轉移創造有利的微環境。
外泌體是各種細胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡。因外泌體內含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質對相鄰細胞具有交換信息的功能。作為細胞間信號傳導的通訊工具和作為病等各種疾病的生物標記話題比較熱門。近些年關于外泌體研究很普遍,但是關于外泌體相關的實驗技術,關于需要改進的課題存在很多。例如,外泌體提純方法中,超速離心法和聚合物沉淀法(市售試劑盒)混入多種雜質,給后續實驗產生了許多障礙。抗體親和法和密度梯度離心法,雖然可以提取到高純度的外泌體,但不能提取完整外泌體,無法分析外泌體具有的生理功能,也是兩種提取方法的問題所在。而免疫印跡法(WB)和Elisa檢測法作為被普遍應用的外泌體檢測的一般方法,又存在檢測時需使用大量外泌體和難以檢測到低表達水平的標記蛋白。不同肝臟疾病中,細胞分泌的外泌體所攜帶的核酸和蛋白組分之間存在差異。
利用蛋白質免疫印跡和酶聯免疫吸附分析技術可以對外泌體標志性蛋白質進行定性定量分析。其中蛋白免疫印跡是外泌體的經典表征手段之一,操作時往往需要細胞裂解液作為陰性對照。常用的外泌體標志性蛋白質包括四跨膜蛋白質CD63、CD81、CD9、中流易感基因101蛋白(TSG101)、水通道蛋白2(AQP2,尿液中)和凋亡誘導因子6相互作用蛋白(Alix)等,內參蛋白質可以是肌動蛋白(βActin)或甘油醛-3-磷酸脫氫酶,陰性對照蛋白可以是阻抑素(PHB,線粒體標志蛋白)或鈣聯結蛋白Calnexin。在酶聯免疫吸附析法中,外泌體裂解液通過固載有抗體的固相基質,隨后與檢測抗體共孵育。兩種方法均存在操作繁瑣、耗時長的問題,相比較而言,酶聯免疫吸附分析法比蛋白質免疫印跡法更加快速,適用于高通量分析。所有培養的細胞類型均可分泌外泌體。血漿外泌體iTRAQ
外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合,進而喚醒靶細胞細胞內的信號通路。血清外泌體lncRNA測序
近年來,生物醫學領域上,干細胞在防病抗病、延緩衰老、組織再生等方面發揮著巨大的潛力,成為人們關注的熱點。隨著研究的不斷深入,新的風口再次出現,它那就是——外泌體。外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質的小膜泡(30-150nm)。現今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。外泌體中含有豐富的蛋白質和遺傳物質DNA以及RNA等。它的存在,就像是生物界的郵差,可以在細胞間運輸和轉移生物活性分子,是細胞間通訊交流的載體。上海宇玫博生物科技有限公司。血清外泌體lncRNA測序