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血漿血清提取試劑盒原理

來源: 發布時間:2024-01-20

利用蛋白質免疫印跡和酶聯免疫吸附分析技術可以對外泌體標志性蛋白質進行定性定量分析。其中蛋白免疫印跡是外泌體的經典表征手段之一,操作時往往需要細胞裂解液作為陰性對照。常用的外泌體標志性蛋白質包括四跨膜蛋白質CD63、CD81、CD9、中流易感基因101蛋白(TSG101)、水通道蛋白2(AQP2,尿液中)和凋亡誘導因子6相互作用蛋白(Alix)等,內參蛋白質可以是肌動蛋白(βActin)或甘油醛-3-磷酸脫氫酶,陰性對照蛋白可以是阻抑素(PHB,線粒體標志蛋白)或鈣聯結蛋白Calnexin。在酶聯免疫吸附析法中,外泌體裂解液通過固載有抗體的固相基質,隨后與檢測抗體共孵育。兩種方法均存在操作繁瑣、耗時長的問題,相比較而言,酶聯免疫吸附分析法比蛋白質免疫印跡法更加快速,適用于高通量分析。外泌體天然的可以攜帶遺傳到靶細胞中,從而在生物學和致病過程中誘導遺傳修飾。血漿血清提取試劑盒原理

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有研究表明外泌體通過喚醒瘤相關信號通路、誘導免疫耐受、重塑細胞外基質、增強瘤細胞侵襲性和調控瘤微環境促進瘤的發生和發展,外泌體在瘤的診斷上有諸多優勢:外泌體可保護其中的核酸類物質,防止其迅速降解;外泌體的形成與親源細胞的狀態密切相關;針對外泌體內容物的檢測比傳統的瘤標志物更具有特異性;外泌體寬泛存在于多種體液樣本中,以其為基礎的瘤診斷可在病情發展過程中及時監測分子標志物的變化,這種檢測更易監控且樣本更易收集。外泌體粒徑結果免疫印跡法(WB)和Elisa檢測法作為被普遍應用的外泌體檢測的一般方法。

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所有真核細胞類型包括造血細胞、上皮細胞、神經細胞、干細胞、脂肪細胞和病癥細胞均可在培養條件下分泌外泌體。體內所有體液,包括血液、唾液、腦脊液、腹水,甚至尿液中都可以分離得到外泌體。這些外泌體傳輸多種信號分子,包括蛋白質、信使核糖核酸(mRNA)和非編碼核糖核酸(RNA),其攜帶的分子可以被其他細胞吸收。因此,外泌體可以將生物信息轉移到相鄰細胞。這種細胞間通信不只涉及生理功能,還涉及一些疾病的發病機理,包括瘤、心血管疾病和神經退行性疾病等。

通過改變外泌體的溶解性或者分散性,可以將它們從體液或細胞培養液中沉淀出來。常見的方法是使用聚乙二醇或凝集素來沉淀樣品中的外泌體。聚乙二醇是一種水溶性非離子化合物,不含水的聚乙二醇可以通過“劫持”水分子增加疏水性蛋白和脂質分子的相互結合力,從而迫使其脫離溶液,進而在低速離心條件下發生沉降。凝集素是一種具有高度特異性的碳水化合物結合蛋白,可通過與外泌體質膜糖蛋白上的糖鏈結合來改變外泌體的溶解性。此外,還可使用魚精蛋白、醋酸鈉、有機溶劑沉淀等方法進行沉淀分離。外泌體膜蛋白可以與靶細胞膜蛋白結合,進而喚醒靶細胞細胞內的信號通路。

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瘤轉移是病癥致死的首要原因。長久以來,對瘤轉移機理的研究一直聚焦于瘤與機體之間的相互作用。然而在近年來,由于外泌體被發現可以作為包括瘤在內細胞之間信息傳遞的一種新方式,瘤轉移研究領域再度變得火熱起來。我所(瘤轉移的預警和預防研究所)以謝曉東博士為首的外泌體研究小組一直致力于研究瘤轉移與外泌體之間的聯系,已取得一系列成果。外泌體是指包含了復雜RNA和蛋白質的小膜泡(30-150nm),現今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。多種細胞在正常及病理狀態下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內內溶酶體微粒內陷形成的多囊泡體,經多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質中。突狀細胞釋放的外泌體可以強化殺傷性T細胞對癥狀細胞的特異性反應。m2外泌體

外泌體在化療藥物的促轉移過程中具有重要的作用。血漿血清提取試劑盒原理

外泌體研究可以指導診治肝損傷、酒精或非酒精性脂肪肝等其他肝臟疾病。藥物誘導肝損傷(DILI)大鼠模型中,尿外泌體中的蛋白含量減少,包括CD26、CD81和其他潛在的標志物蛋白。而另一項研究則發現DILI大鼠血清中分離到的外泌體含有更高水平的蛋白,如HSP70、HSP90等。MSCs來源的外泌體可以誘導肝細胞增殖相關基因表達,減弱CCL4誘導的肝損傷。而酒精刺激會促進外泌體的分泌,miRNAs水平也會升高,并促進細胞因子的分泌,喚醒單核細胞的分化。盡管已取得上述成果,我們對外泌體的研究尚不夠深入,外泌體在肝臟生理和病理中的重要作用及其臨床應用仍有待繼續探索。血漿血清提取試劑盒原理