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來源: 發(fā)布時間:2022-03-28

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經(jīng)過熱處理的血清中沉淀物會顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察像“小黑點”,而且由于這些“小黑點”的布朗運動在顯微鏡下被放大,感覺是在游動,所以經(jīng)常被誤認為血清被微生物污染。通常這些小黑點不會影響細胞生長,但如果懷疑血清存在微生物污染,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批次的血清。可將適量血清用培養(yǎng)液稀釋至10%濃度后培養(yǎng)1-3天,觀察小黑點是否急劇增多,或取適量血清在LB平板上涂板培養(yǎng)觀察是否產(chǎn)生菌落,以確定是否存在微生物污染。請勿將血清在37℃放置過長時間,否則血清會逐漸變渾濁,同時血清中的有效成分也會逐漸失活而影響血清質(zhì)量。北京依科賽血清代理血清替代物和無血清的優(yōu)勢。

按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:(1)解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。(2)血清分裝凍存時,須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。(3)勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。(4)勿將血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質(zhì)。(5)血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。(6)若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。

血清替代物CDM-HDSerumReplacement。CDM-HD不需要任何適應(yīng),但對高密度生長的細胞進行了優(yōu)化。為了獲得比較好的結(jié)果,在FiberCell®系統(tǒng)中空纖維生物反應(yīng)器內(nèi)細胞達到高密度后,切換到CDM-HD,通常是在一周左右的培養(yǎng)后。CDM-HD不含任何碳源。當(dāng)使用低葡萄糖培養(yǎng)基(如RPMI)時,重要的是將葡萄糖濃度補充到每升4.5克。CDM-HD不含蛋白質(zhì),不含任何細胞附著因子。在含CDM-HD的培養(yǎng)基中接種細胞時,只在細胞上添加10%的胎牛血清。這將為貼壁細胞提供所需的附著因子。這對懸浮細胞是不需要的,但雜交瘤細胞系應(yīng)被視為貼壁細胞。CDM-HD可用于其他培養(yǎng)系統(tǒng),如紡紗培養(yǎng)和滾輪培養(yǎng)。在這些應(yīng)用中加入多離子F60或其他保護細胞膜的表面活性劑。CDM-HD不含蛋白質(zhì)。所分泌的感興趣的蛋白質(zhì)可能是你細胞培養(yǎng)上清中有意義的蛋白質(zhì)。你應(yīng)該重新評估你的凈化方案,因為整個步驟有時可以取消,提高產(chǎn)量。請記住,CDM-HD不含蛋白質(zhì),也不含鐵蛋白,所以其游離鐵含量會高于標(biāo)準培養(yǎng)基。注意任何可能是緩沖液或凈化協(xié)議一部分的螯合劑。helios的血清替代物好用嗎?

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