重組蛋白含與不含 CF 有什么區(qū)別?CF,是 Carrier Free 的意思。一般來說,為了對重組蛋白的結(jié)構(gòu)及活性進(jìn)行保護(hù),生產(chǎn)廠家會(huì)在蛋白產(chǎn)品中添加牛血清白蛋白(BSA)作為載體蛋白。但考慮到 BSA 會(huì)對某些實(shí)驗(yàn)造成影響,廠家又研發(fā)出不含載體蛋白(BSA)的產(chǎn)品,即 Carrier Free 蛋白。客戶如何選擇呢?在用途上,一般情況下,我們建議使用含有 BSA 的重組蛋白用于細(xì)胞或組織培養(yǎng),或作為 ELISA 標(biāo)準(zhǔn)品。相對而言,當(dāng) BSA 可能會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)時(shí),比如體內(nèi)實(shí)驗(yàn)、蛋白標(biāo)記等,則推薦使用 CF 蛋白。另外,如果實(shí)驗(yàn)平臺(tái)有特殊要求,也應(yīng)根據(jù)要求選擇不含 BSA 的蛋白。比較熱門的重組蛋白主要為重組細(xì)胞因子。小鼠BMP-9重組蛋白
不同表達(dá)系統(tǒng)所生成的重組蛋白間有何主要區(qū)別?以賽默飛為例,Thermo Fisher Scientific? 所提供的重組蛋白產(chǎn)品通常在大腸桿菌,昆蟲細(xì)胞或哺乳動(dòng)物細(xì)胞等不同的表達(dá)系統(tǒng)中產(chǎn)生。不同表達(dá)系統(tǒng)之間產(chǎn)生的重組蛋白的主要差別在于這些蛋白所攜帶的翻譯后修飾,如糖基化修飾。在大腸桿菌中生成的重組蛋白未經(jīng)糖基化。在昆蟲細(xì)胞中產(chǎn)生的重組蛋白通常經(jīng)有部分糖基化,但不含半乳糖和唾液脫鹽酸,糖鏈也無復(fù)雜分支。在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中生成的重組蛋白會(huì)發(fā)生附帶完全的糖基化修飾。備注:Mimic? Sf9 昆蟲細(xì)胞(來源于sf9昆蟲細(xì)胞系,經(jīng)改造可穩(wěn)定表達(dá)多種哺乳動(dòng)物糖基轉(zhuǎn)移酶)可產(chǎn)生用于表達(dá)帶末端唾液酸和半乳糖的復(fù)雜的N-糖鏈。GMP級(jí)重組蛋白定制重組蛋白到貨后,如何操作?
常見的重組蛋白藥物:生長因子viii,幫助血友病患者形成血塊;非格司汀和sargramostim(造血骨髓因子),促進(jìn)放療或移植后白細(xì)胞計(jì)數(shù);胰島素,用于糖尿病;IGF1,用于某些生長問題;干擾素(阿爾法),用于乙型和丙型肝炎、生殖器疣、某些白血病和其他疾病;干擾素(β),用于多發(fā)性硬化癥;干擾素(伽瑪),用于慢性肉芽腫病;白細(xì)胞介素-2,殺死病變細(xì)胞;生長因子,用于生長因子缺乏癥;組織纖溶酶原actin劑(t-PA),溶解血凝塊,預(yù)防心臟病發(fā)作,減輕其嚴(yán)重程度。
PeproTech Inc. 創(chuàng)立于1988年,始終致力于為生命科學(xué)研究開發(fā)重組蛋白及相關(guān)產(chǎn)品,如今已成為能提供多種高質(zhì)量細(xì)胞因子和重組蛋白,相應(yīng)的單克隆、多克隆和生物素標(biāo)記抗體,以及ELISA試劑盒的世界。PeproTech Inc.的產(chǎn)品涵蓋免疫調(diào)節(jié)蛋白、白介素、集落刺激因子、生長因子、化學(xué)趨化因子、干擾素、脂聯(lián)素、成纖維生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子、壞死因子、神經(jīng)營養(yǎng)素和防御素等諸多生命科學(xué)研究領(lǐng)域中重要的生物活性分子。為跟上當(dāng)今科研發(fā)展、滿足日益增長的需求,PeproTech Inc.研制出無動(dòng)物成分的重組蛋白(animal-free recombinant proteins)。這些蛋白是利用專有的無動(dòng)物成分生產(chǎn)設(shè)施,在嚴(yán)格的無動(dòng)物成分條件下生產(chǎn)出來,因此痕量的動(dòng)物源性污染引發(fā)潛在問題的可能性被降至低,從而完全達(dá)到臨床前研究用標(biāo)準(zhǔn)。普欣生物是國內(nèi)外多家著名生物試劑公司和臨床診斷公司的重組蛋白OEM供應(yīng)商。
體外生產(chǎn)重組蛋白有多個(gè)表達(dá)系統(tǒng),重組蛋白的預(yù)期用途對于表達(dá)系統(tǒng)的選擇和決定其優(yōu)先次序是很重要的。對于某些應(yīng)用 (如功能解析或藥物篩選) 來說,保持蛋白的天然功能和特性是必需的; 但如果是當(dāng)成免疫原來使用則關(guān)系不大。其他需要實(shí)際考慮的因素包括蛋白質(zhì)產(chǎn)量、時(shí)間限制或生產(chǎn)成本。明確項(xiàng)目需求對于確保選擇合適的表達(dá)系統(tǒng)、克隆策略和所需產(chǎn)品的生產(chǎn)策略是至關(guān)重要的。實(shí)際上, 在缺少目標(biāo)蛋白質(zhì)或相似蛋白質(zhì)歷史表達(dá)數(shù)據(jù)的情況下,要預(yù)測某個(gè)蛋白質(zhì)表達(dá)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果是非常困難的。通常的做法是使用數(shù)個(gè)表達(dá)系統(tǒng), 一開始使用簡單的、性價(jià)比高的表達(dá)系統(tǒng),失敗后再使用更復(fù)雜的表達(dá)系統(tǒng)。重組蛋白與重組融合蛋白的區(qū)別。大鼠BMP-2重組蛋白定制
溶解后的重組蛋白如何保存?小鼠BMP-9重組蛋白
CHO細(xì)胞即:中國倉鼠卵巢細(xì)胞(Chinese Hamster Ovary),它是基因工程疫苗研究中具有代表性的哺乳動(dòng)物表達(dá)載體,是用來表達(dá)外源蛋白多也是成功的一類細(xì)胞。市場上超過70%的蛋白質(zhì)藥物選擇的制造細(xì)胞就是CHO細(xì)胞。CHO細(xì)胞可以在外源表達(dá)的蛋白質(zhì)上摻入復(fù)雜的聚糖,如N-連接聚糖。有助于蛋白質(zhì)的折疊和細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸。重組蛋白表達(dá)側(cè)重于大化每個(gè)分子中含有唾液酸的復(fù)雜聚糖的數(shù)量,CHO細(xì)胞糖基化之后,能增加對蛋白水解的抵抗力和延長體內(nèi)血清半衰期,所以CHO細(xì)胞成為用作重組蛋白的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系。小鼠BMP-9重組蛋白
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