免疫組化,全稱為免疫組織化學(xué)技術(shù)(Immunohistochemistry),是結(jié)合了免疫學(xué)與組織化學(xué)原理的一種檢測技術(shù)。它利用抗原與抗體之間特異性的相互作用,通過將標(biāo)記(如熒光素、酶標(biāo)記)的特異性抗體應(yīng)用于組織或細(xì)胞切片上,來識別和定位組織或細(xì)胞內(nèi)的目標(biāo)抗原,如蛋白質(zhì)或多肽。這一過程不 能夠顯示出目標(biāo)分子在細(xì)胞或組織中的分布情況,還能對其進(jìn)行定性、定量分析,甚至達(dá)到亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的分辨率。免疫組化技術(shù)是病理學(xué)、生物醫(yī)學(xué)研究中不可或缺的工具,對于疾病的診斷、了解疾病發(fā)生機制、指導(dǎo)臨床醫(yī)療方案(尤其是Tumor學(xué)領(lǐng)域)具有重要意義。免疫組化在Tumor分類、分期中發(fā)揮關(guān)鍵作用。潮州病理切片免疫組化價格
幾種常用免疫組織化學(xué)方法的原理:1、免疫熒光方法:利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理,先將已知抗體標(biāo)上熒光素,以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會發(fā)出一定波長的熒光,從而可確定組織中某種抗原的定位,進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。2、免疫酶標(biāo)方法:基本原理是先以酶標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,通過光鏡或電鏡,對細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)的各種抗原成分進(jìn)行定位研究。免疫酶標(biāo)技術(shù)是目前常用的技術(shù)。3、免疫膠體金技術(shù):免疫膠體金技術(shù)是以膠體金這樣一種特殊的金屬顆粒作為標(biāo)記物。膠體金是指金的水溶膠,它能迅速而穩(wěn)定地吸附蛋白,對蛋白的生物學(xué)活性則沒有明顯的影響。因此,用膠體金標(biāo)記一抗、二抗或其他能特異性結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針,就能對組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性、定位,甚至定量研究。浙江免疫組化實驗流程免疫組化的價格是多少?
在免疫組化實驗中可通過以下方式防止邊緣效應(yīng):一是保證試劑均勻分布。在加樣過程中,緩慢且均勻地滴加試劑,避免試劑在邊緣和中心的分布不均,可以從邊緣往中心逐步添加。二是優(yōu)化孵育環(huán)境。確保孵育時的濕度均勻,可使用保濕盒,避免邊緣區(qū)域因濕度降低而影響試劑作用,從而導(dǎo)致染色差異。三是注意樣本處理。樣本在固定、包埋等前期處理時,保證操作的一致性,避免樣本邊緣與中心部分出現(xiàn)物理或化學(xué)性質(zhì)的差異。四是控制反應(yīng)條件。如溫度、反應(yīng)時間等,使整個樣本處于相同的反應(yīng)條件下,減少因邊緣散熱快等因素造成的與中心區(qū)域的反應(yīng)差異。
免疫組化實驗在以下情況下需要特別注意實驗條件的優(yōu)化:1、使用新型抗體或試劑時:新型抗體或試劑的引入可能帶來不同的特異性、親和力和穩(wěn)定性。因此,在使用前需要仔細(xì)查閱相關(guān)文獻(xiàn),了解其特性,并通過預(yù)實驗來優(yōu)化其工作濃度和條件,以確保實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。2、樣本類型和處理方法變化時:不同的樣本類型(如石蠟切片、冰凍切片等)和處理方法(如固定、脫水、包埋等)可能會影響抗原的暴露和保存。因此,當(dāng)樣本類型或處理方法發(fā)生變化時,需要調(diào)整實驗條件,如抗體的濃度、孵育時間等,以適應(yīng)新的樣本特性。3、對實驗結(jié)果的靈敏度和特異性要求較高時:在某些情況下,如疾病診斷、藥物研發(fā)等,對免疫組化實驗的靈敏度和特異性要求非常高。此時,需要仔細(xì)優(yōu)化實驗條件,如使用特異性更高的抗體、優(yōu)化抗原修復(fù)條件、選擇更合適的顯色劑等,以提高實驗的靈敏度和特異性。4、出現(xiàn)非特異性染色或背景噪音較高時:非特異性染色和背景噪音是免疫組化實驗中常見的問題。當(dāng)這些問題出現(xiàn)時,需要仔細(xì)檢查實驗流程,找出問題所在,并針對性地優(yōu)化實驗條件,如增加洗滌步驟、調(diào)整抗體濃度等,以降低非特異性染色和背景噪音。特異性抗體的選擇是決定免疫組化實驗成功與否的重要因素之一。
在免疫組化實驗中,可通過以下方法減少樣本自身熒光:一是優(yōu)化樣本固定方法。選擇合適的固定劑,如用多聚甲醛代替福爾馬林,可降低某些樣本的自身熒光,同時要控制好固定時間和溫度。二是進(jìn)行樣本預(yù)處理。例如使用特殊的化學(xué)試劑處理樣本,像硼氫化鈉可以和樣本中的醛基反應(yīng),減少自身熒光產(chǎn)生的物質(zhì)。三是調(diào)整激發(fā)和發(fā)射波長。通過預(yù)實驗確定激發(fā)和發(fā)射波長,避開樣本自身熒光較強的波長區(qū)域,從而降低自身熒光對實驗結(jié)果的干擾。四是使用熒光淬滅劑。在不影響目標(biāo)熒光信號的前提下,適當(dāng)使用熒光淬滅劑處理樣本,減少自身熒光的影響。通過熒光或酶標(biāo)記的二抗,免疫組化在顯微鏡下直觀展示細(xì)胞內(nèi)蛋白分布。浙江免疫組化實驗流程
在Tumor研究中,免疫組化是鑒定Tumor標(biāo)志物、了解其表達(dá)模式的關(guān)鍵工具。潮州病理切片免疫組化價格
在免疫組化研究中,優(yōu)化組織微陣列(TMA)設(shè)計可從以下幾方面提升研究效率與數(shù)據(jù)質(zhì)量。一是合理選擇樣本,確保納入的樣本具有代表性且來源多樣,這樣能增加數(shù)據(jù)的豐富度。二是根據(jù)研究目的規(guī)劃陣列布局,將不同實驗組和對照組的樣本有序排列,便于對比分析。三是注意樣本的大小和間距,樣本過小可能導(dǎo)致信息缺失,間距過小則容易出現(xiàn)交叉污染,應(yīng)根據(jù)實際情況優(yōu)化。四是對樣本進(jìn)行預(yù)篩選,去除質(zhì)量較差的樣本,如組織破碎或有明顯損傷的,保證數(shù)據(jù)的可靠性。五是在設(shè)計時考慮后續(xù)數(shù)據(jù)分析的便利性,比如可以按照特定的分類方式進(jìn)行排列,使數(shù)據(jù)整理和統(tǒng)計更高效。潮州病理切片免疫組化價格