與常規的PCR的方法相比，dPCR有很好的優勢。

***定量

常規PCR和實時熒光PCR定量檢測都需要已知拷貝數的標準DNA制定標準曲線，由于樣品測定在各種條件上不會完全一致，會造成PCR擴增效率的差異，從而影響定量結果的準確性。而ddPCR不受標準曲線和擴增動力學影響，可以進行***定量。

樣品需求量低

在檢測珍貴樣品和樣品核酸存在降解時具有明顯的優勢。

高靈敏度

ddPCR本質上是將一個傳統的PCR反應分成了數萬個**的PCR反應，在這些反應中可以精確地檢測到很小的目的片段的差異、單拷貝甚至是低濃度混雜樣品，且能避免非同源異質雙鏈的形成。

高耐受性

由于目的序列被分配到多個微滴中，***降低了體系間的影響以及背景序列和***物對反應的干擾，擴增基質效應大大減小。 具備一鍵式自動化操作。南京微流控芯片數字PCR

**個體化診療

通過檢測T790M位點突變情況，可以更好地評估一代TKI***的療效及耐藥情況并指導第三代TKI靶向藥Osimertinib的使用。然而，由于qPCR平臺ARMS檢測技術的靈敏度有限，沒有辦法在含大量EGFR基因野生型背景核酸中高效準確的檢測到T790M突變。這個時候dPCR技術展現出了****的檢測精度，此外，dPCR***定量的優勢也能充分發揮出來了，可以監控突變含量變化，做到及早發現耐藥。

2.）基因表達分析

伊馬替尼（Imatinib）可以有效幫助很多慢性髓細胞白血病（CML）患者延長生存期，但是臨床上發現，伊馬替尼的療效與BCR-ABL1融合基因的轉錄產物表達量有很大的關系。研究人員采用dPCR對CML患者的BCR-ABL1融合基因轉錄產物進行測定，結果檢測下限可以達到0.001%，顯示出dPCR在痕量核酸檢測方面比qPCR具有無可比擬的優勢 常州數字PCR單細胞研究：測序、PCR。

相對于二代測序、基因芯片和定量PCR而言，數字PCR具備以下優勢:

● 靈敏度可達到單個核酸分子：檢測限低至0.001%，主要系為數字PCR可以實現靶標DNA/RNA的生物濃縮；

● 無需標準曲線活參照基因進行對比來測定核算量，可對靶分子起始量進行***定量，直接獨處DNA分子的個數；

● 適合環境復雜樣品的檢測：終點PCR檢測，不依賴Ct值，不依賴擴增效率，能克服PCR***劑的影響，避免樣品間的交叉***問題，適合各類復雜環境中的樣本進行***定量，如動血樣、糞便、尿液、痰液、水樣、土壤、植物等；

要了解為什么傳統PCR存在限制，務必要了解PCR反應過程中發生了什么。基本PCR運行可以分為三個階段：指數期每個循環積聚的產物準確加倍（假定**反應效率）。該反應具有高度特異性和精確度。出現指數式擴增，因為所有試劑均新鮮可用，反應的動力學推動反應有利于擴增子加倍。線性期（高變異性）隨著反應繼續，一些試劑因擴增而被消耗。反應開始減緩，并且每個循環的PCR產物不再加倍。平臺期（終點：使用傳統方法進行凝膠檢測）反應停止，不再產生更多產物，并且如果放置時間夠長，PCR產物將開始降解。因為每個樣品具有不同的反應動力學，所以每支試管或每個反應將在不同的時間點進入平臺期。在平臺期可以看到這些差異。在平臺期內，傳統PCR進行測量，又稱為終點檢測。檢測數量一次可達96個樣品。

       數字PCR采用的策略概括起來非常簡單，就是“分而治之”（divide and conquer）［1］，這種做法非常類似于計算機科學中的“分治算法”，將一個標準PCR反應分配到大量微小的反應器中，在每個反應器中包含或不包含一個或多個拷貝的目標分子( DNA模板) ，實現“單分子模板PCR擴增”，擴增結束后，通過陽性反應器的數目“數出”目標序列的拷貝數。在實際的數字PCR實驗中，事實上是通過呈現兩種信號類型的反應器比例和數目進行統計學分析，計算出原始樣本中的模板拷貝數。適用復雜樣品的檢測。無錫流式數字PCR哪家好

MiniDrop?研發團隊由微流控、光學、機電學、化學、臨床醫學、分子生物學等多學科交叉領域的**組成。南京微流控芯片數字PCR

定量PCR和數字PCR的特點：

       5. 目前定量PCR已經能實現高通量樣品條件下的自動化操作。   

       6. 數字PCR在單分子層面上的***定量，可以徹底擺脫對標準曲線的依賴而直接給出靶序列的拷貝數，提高了實驗結果在批內和批間的穩定性，甚至能用來對標準品進行定標。   

       7. 基于***定量的方式，數字PCR結果的高重復性和高精度可實現微小差異的基因表達分析，如等位基因的不平衡表達、單細胞基因表達分析、microRNA表達分析等等。所謂“微小差異”的標準一般而言是指表達水平的差異在2倍以內。   

       8. 同等條件下，數字PCR在靈敏度方面擁有優勢，使得該技術已成為**的液態活檢、病原微生物檢測、轉基因成分測定、宿主殘留DNA分析等的熱門技術。

浚和（上海）儀器有限公司是一家供應國內外先進儀器和設備的專業供應商和服務商，致力于為客戶提供專業的定制化解決方案。多年來，持續為醫藥、化工、高校、科研單位、檢測院等多個行業提供先進的產品和專業的服務。

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