精細診斷是精細醫(yī)學的關鍵環(huán)節(jié),液體活檢作為一種無創(chuàng)、均一的檢測技術,迅速成為精細診斷領域的新星,2015年被《麻省理工大學科技評論》評選為年度**突破技術,2017年入選世界經濟論壇評出的全球**新興技術,引發(fā)了全球科研、臨床和產業(yè)界的極大熱情,已在**、產前診斷、***移植等疾病領域***被應用。數(shù)字PCR技術與高通量的二代測序技術,共同組成液體活檢領域的兩大利器;數(shù)字PCR技術是公認的液體活檢領域靈敏度比較高的檢測方法,采用有限稀釋的方法將目標分子分割到**的反應體系中,在不依賴標準曲線條件下實現(xiàn)靶標***定量檢測,能檢測低至0.01%的突變基因;Bio-Rad及ThermoFisher目前是這一領域的主導者,分別采用微滴或芯片方式將樣本分割成兩萬份,MiniDrop?創(chuàng)新性采用高壓驅動的方法將樣本分割成50萬份,打破了國外廠商在微滴式數(shù)字PCR領域的壟斷。永諾生物MicroDrop-100微滴式數(shù)字PCR儀超越行業(yè)的10萬個微滴數(shù),保證泊松分布所需要的充分的樣本量。南京JUE對定量數(shù)字PCR解決方案
MiniDrop數(shù)字PCR儀由Creator微滴生成儀、Detector微滴檢測儀、MDMicrochip微流控芯片及MDPlotter數(shù)據(jù)分析軟件組成,該系統(tǒng)的**為微流控微滴生成技術,采用原創(chuàng)性的油液,在40um微管道中利用氣壓驅動在2分鐘內生成50萬微滴,單次運行生成400萬微滴,微滴體積達皮升級,檢測線性范圍達到5個數(shù)量級,各項指標均超越國內外的主流產品。MiniDrop創(chuàng)新性采用高壓驅動的方法將樣本分割成50萬份,打破了國外廠商在微滴式數(shù)字PCR領域的壟斷。-----深圳國產數(shù)字PCR品牌分辨率——低至0.1倍基因表達差異。
要了解為什么傳統(tǒng)PCR存在限制,務必要了解PCR反應過程中發(fā)生了什么。基本PCR運行可以分為三個階段:指數(shù)期每個循環(huán)積聚的產物準確加倍(假定**反應效率)。該反應具有高度特異性和精確度。出現(xiàn)指數(shù)式擴增,因為所有試劑均新鮮可用,反應的動力學推動反應有利于擴增子加倍。線性期(高變異性)隨著反應繼續(xù),一些試劑因擴增而被消耗。反應開始減緩,并且每個循環(huán)的PCR產物不再加倍。平臺期(終點:使用傳統(tǒng)方法進行凝膠檢測)反應停止,不再產生更多產物,并且如果放置時間夠長,PCR產物將開始降解。因為每個樣品具有不同的反應動力學,所以每支試管或每個反應將在不同的時間點進入平臺期。在平臺期可以看到這些差異。在平臺期內,傳統(tǒng)PCR進行測量,又稱為終點檢測。
數(shù)字PCR為juedui定量,qPCR為相對定量,數(shù)字PCR較qPCR更精細、更靈敏。所以說,未來數(shù)字PCR將成為qPCR的重要補充,在部分領域逐步替代熒光定量PCR。未 來這些領域將廣泛應用到數(shù)字PCR:科研:高校(生命科學學院、環(huán)境學院、醫(yī)學院、藥學院)等。醫(yī)院:病理科、血液科、婦產科、心血管科、檢驗科、轉化醫(yī)學中心:研究院單位、疾控中心、海關(出入境檢驗檢疫)、質監(jiān)局、環(huán)境/環(huán)保局等。企業(yè):第三方檢測機構、IVD(分子體外診斷試劑)、生物制藥等。您了解數(shù)字PCR儀的優(yōu)勢嗎?
CNV(CopyNumberVariations,拷貝數(shù)變異)研究需要極高的定量精度以區(qū)別不同拷貝數(shù)之間的微小差異,測序方法適用于高于30%的變異率檢測,而qPCR的比較**辨在1.5倍左右,數(shù)字PCR通過直接計數(shù)目標基因與參照基因(拷貝數(shù)為1的基因,例如RNaseP)的數(shù)目, 計算比值,直接得到目標基因的拷貝數(shù)可以達到極高的拷貝數(shù)分辨精度。除此之外,dPCR在病原微生物檢測、microRNA研究、基因表達研究、NGS測序文庫的***定量、表觀遺傳學直接相關的DNA甲基化定量檢測、ChIP定量鑒定等領域的應用都令人極為期待,而在轉基因成分鑒定、分子標準品精確定量、環(huán)境樣本檢測等具體的應用方向上,已經有大量實驗數(shù)據(jù)和結果證明了dPCR技術的優(yōu)良性能。采用微滴式技術高達100,000個的微滴。南通JUE對定量數(shù)字PCR代理商
理論上可覆蓋qPCR(熒光定量PCR)的所有應用。南京JUE對定量數(shù)字PCR解決方案
數(shù)字PCR可以直接計算目標序列的拷貝數(shù),因此無需依賴于對照樣品和標準曲線就可以進行精確的***定量檢測;此外,由于數(shù)字PCR在進行結果判讀時 判斷有/無兩種擴增狀態(tài),因此也不需要檢測熒光信號與設定閾值線的交點,完全不依賴于Ct值的鑒定,因此數(shù)字PCR的反應受擴增效率的影響**降低,對PCR反應***物的耐受能力**提高;數(shù)字PCR實驗中標準反應體系分配的過程可以極大程度上降低與目標序列有競爭性作用的背景序列濃度,因此數(shù)字PCR技術也特別適合在復雜背景中檢測稀有突變。南京JUE對定量數(shù)字PCR解決方案
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