數字PCR也叫Digital PCR(dPCR),是近幾年發展起來的一種核酸定量分析技術。相較于傳統熒光定量PCR來說,數字PCR對結果的判定不依賴于擴增曲線循環Ct值,不受擴增效率的影響,能夠直接讀出DNA的分子個數,能夠對起始樣本核酸分子***定量。
數字PCR基本原理是將一個樣本分成幾十到幾萬份,然后再將其分配到不同的反應單元中,使每個微滴單元包含一個或多個拷貝的核酸分子(即DNA模板),每個單元都會對目標分子進行擴增,然后再對每個單元進行熒光信號的統計并計算。相對而言,傳統PCR或qPCR反應都是發生于同一體系當中,這也是數字PCR與其比較大的區別。
線性范圍達到6個數量級,靈敏度高達萬分之一。杭州微滴式數字PCR簡介
CNV(Copy Number Variations,拷貝數變異)研究需要極高的定量精度以區別不同拷貝數之間的微小差異,測序方法適用于高于30%的變異率檢測,而qPCR的比較**辨在1.5倍左右,數字PCR通過直接計數目標基因與參照基因( 拷貝數為1的基因,例如RNaseP) 的數目,計算比值,直接得到目標基因的拷貝數可以達到極高的拷貝數分辨精度。
除此之外,dPCR在病原微生物檢測、microRNA研究、基因表達研究、NGS測序文庫的***定量、表觀遺傳學直接相關的DNA甲基化定量檢測、ChIP定量鑒定等領域的應用都令人極為期待,而在轉基因成分鑒定、分子標準品精確定量、環境樣本檢測等具體的應用方向上,已經有大量實驗數據和結果證明了dPCR技術的優良性能。
杭州微滴式數字PCR簡介FAM、VIC雙通道熒光檢測。
無創產前檢查
鐮狀細胞貧血(sickle cell anemia)是HBB基因突變引起的常染色體顯性遺傳病,有嚴重的危害,可以導致高達5%的胎兒死亡率及4.62%的孕婦死亡率。而精細有效的無創產前診斷是預防鐮狀細胞貧血患兒出生的有效方法。研究人員采用dPCR技術檢測孕婦胎兒游離DNA(cff-DNA)HBB基因突變。結果顯示,dPCR技術能夠確定87%的男性胎兒(n=45)和75%的女性胎兒(n=20)HBB基因的突變狀態。當cff-DNA濃度大于7%時,可以**的檢測出HBB基因突變[3],可以說是相當厲害了。
數字PCR是一種核酸分子***值定量技術,能夠直接數出DNA分子的個數,是對起始樣品的***值定量。該試劑盒采用創新的一步法逆轉錄數字PCR技術,將*****的RNA逆轉錄及數字PCR擴增整合到一個反應體系,單管雙檢同時測定*****的兩個**基因,消除***變異帶來的漏檢風險。
MicroDrop-100全新微滴式數字PCR系統為永諾生物旗下子公司永諾醫療自主研發的檢測設備,此系統檢測無需依賴標準物質,可達到***定量,具有超高靈敏度,檢測靈敏度高達1個拷貝,且具有較好的重復性,降低同樣本不同批次的檢測差異。數字PCR結果采取終點判讀法,相比熒光定量PCR的過程性讀取可有效降低對PCR 擴增效率的依賴、降低PCR***物對檢測結果的影響,對于復雜樣本也能提供穩定的檢測結果等特點,在******臨床實驗及***患者的治療過程中可發揮重要作用。 高靈敏度——數字PCR的靈敏度與同體積反應體系的分割份數成正比。
定量PCR和數字PCR的特點:
1. 在20多年的使用和發展中,定量PCR作為一種技術平臺,已經產出海量的數據,在工業界和分子檢測的某些應用上,定量PCR已經成為“金標準”。基礎研究方面,則形成了被稱為MIQE的“定量PCR標準實驗指南”。
2. 在定量PCR的各種應用中,基因表達分析(gene expression analysis)的應用比重約占七成,綜合各種因素來看,眼下定量PCR還是進行基因表達研究的理想手段。
3. 上述的“各種因素”具體展開,主要包括:通量、自動化程度、各種檢測探針與染料、檢測通道、成本和可參考文獻與protocol的數目等等。
4. 就目前市場上已有的數字PCR設備來看,定量PCR在檢測的線性范圍上具有優勢,意味著同一個run內可對各種表達豐度的樣品進行分析。
液體活檢:早篩、用藥、監測、復發。杭州微滴式數字PCR簡介
產品特點
無需依賴傳統熒光定量PCR的標準曲線即可實現核酸的***定量。
全封閉防污染設計,一鍵式自動化操作。
采用主流可靠的解決方案,系統由微滴生成儀、微滴檢測儀、數據分析軟件組成,并可選配同品牌封膜儀、PCR儀等
微滴生成采用油包水乳化微滴技術,在微管道中利用氣壓驅動,2mins生成高達10萬個皮升級的微滴,高效高產,支持多重數字PCR的開發。
微滴生成芯片為高精度微流控芯片設計,三維微納防污染結構,一張芯片可同時處理8個樣本。
微滴檢測使用雙通道熒光,支持EvaGreen染料法及探針法。
檢測線性范圍達到6個數量級,基因突變檢測靈敏度高達0.01%。
檢測通量高,可一次檢測高達96個樣本,支持靈活設定。
全中文分析軟件,人性化界面設置,多種分析工具供用戶選擇。
本系統為開放式平臺,可使用第三方PCR反應液,支持用戶自行開發試劑、產品。
杭州微滴式數字PCR簡介
浚和(上海)儀器有限公司是一家供應國內外先進儀器和設備的專業供應商和服務商,致力于為客戶提供專業的定制化解決方案。多年來,持續為醫藥、化工、高校、科研單位、檢測院等多個行業提供先進的產品和專業的服務。
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公司主要經營產品包括:等離子清洗機、真空泵、噴霧干燥器、數字PCR、高壓滅菌鍋、培養箱、切片機、水分測定儀、激光粒度儀、光譜儀、溫濕度記錄儀等,目前主要合作品牌有:日本雅馬拓YAMATO、日本KASHIYAMA、日本HORIBA、廣州永諾 、日本KEM等。同時,公司還提供專業的技術服務,如設備的維護、驗證等。
浚和儀器將始終以行業特點為立足點,以客戶需求為導向,不斷地提高自身專業技術能力,不停地完善客戶服務質量,在發展中保持創新的精神,力求與客戶共同進步,為行業的發展作出不懈的努力。