高效液相色譜的歷史

1903年俄國植物化學家茨維特（Tswett）***提出“色譜法”（Chromatography）和“色譜圖”（Chromatogram）的概念。茨維特使用色譜法 chromatography 來描述他的彩色試驗。

1930年以后，相繼出現了紙色譜、離子交換色譜和薄層色譜等液相色譜技術。

1952年，英國學者Martin和Synge 基于他們在分配色譜方面的研究工作，提出了關于氣－液分配色譜的比較完整的理論和方法，把色譜技術向前推進了一大步，這是氣相色譜在此后的十多年間發展十分迅速的原因。

1958年，基于Moore和Stein的工作，離子交換色譜的儀器化導致了氨基酸分析儀的出現，這是近代液相色譜的一個重要嘗試，但分離效率尚不理想。

1960年中后期，氣相色譜理論和實踐發展，以及機械、光學、電子等技術上的進步，液相色譜又開始活躍。到60年代末期把高壓泵和化學鍵合固定相用于液相色譜就出現了HPLC。

1970年中期以后，微處理機技術用于液相色譜，進一步提高了儀器的自動化水平和分析精度。

1990年以后，生物工程和生命科學在國際和國內的迅速發展，為高效液相色譜技術提出了更多、更新的分離、純化、制備的課題，如人類基因組計劃，蛋白質組學有HPLC作預分離等。

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什么是液相色譜？

液相色譜是一類分離與分析技術，其特點是以液體作為流動相，固定相可以有多種形式，如紙、薄板和填充床等。在色譜技術發展的過程中．為了區分各種方法，根據固定相的形式產生了各自的命名，如紙色譜、薄層色譜和柱液相色譜。

經典液相色譜的流動相是依靠重力緩慢地流過色譜柱，因此固定相的粒度不可能太小(100μm～150μm左右)。分離后的樣品是被分級收集后再進行分析的，使得經典液相色譜不僅分離效率低、分析速度慢，而且操作也比較復雜。直到20世紀60年代．發展出粒度小于10μm的高效固定相，并使用了高壓輸液泵和自動記錄的檢測器，克服了經典液相色譜的缺點，發展成高效液相色譜，也稱為高壓液相色譜。

高效液相色譜綜述

HPLC的出現不過三十多年的時間，但這種分離分析技術的發展十分迅猛，應用十分***。其儀器結構和流程多種多樣。典型的高效液相色譜儀結構和流程可用下列方框圖表示(See Fig.3-4)。高效液相色譜儀一般都具備貯液器、高壓泵、梯度洗提裝置（用雙泵）、進樣器、色譜柱、檢測器、恒溫器、記錄儀等主要部件。

高效液相色譜更適宜于分離、分析高沸點、熱穩定性差、有生理活性及相對分子量比較大的物質，因而廣泛應用于核酸、肽類、內酯、稠環芳烴、高聚物、藥物、人體代謝產物、表面活性劑，抗氧化劑、殺蟲劑、除銹劑的分析等物質的分析。

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高效液相色譜相關術語

峰面積(peak area，A)—峰與峰底所包圍的面積。

保留時間(retention time，tR)——從進樣開始到某個組分在柱后出現濃度極大值的時間。

理論塔板數(theoretical plate number，N)——用于定量表示色譜柱的分離效率（簡稱柱效）。

分離度(resolution，R)——相鄰兩峰的保留時間之差與平均峰寬的比值。也叫分辨率，表示相鄰兩峰的分離程度。R≥1.5稱為完全分離。

《中國藥典》規定R應大于1.5。

拖尾因子(tailing factor，T)——T=，用以衡量色譜峰的對稱性。也稱為對稱因子(symmetry factor)或不對稱因子(asymmetry factor)。

《中國藥典》規定T應為0.95~1.05。

T1.05為拖尾峰。