高效液相色譜相關術語

色譜圖(chromatogram)——樣品流經色譜柱和檢測器，所得到的信號-時間曲線，又稱色譜流出曲線(elution profile)。

基線(base line)——經流動相沖洗，柱與流動相達到平衡后，檢測器測出一段時間的流出曲線。一般應平行于時間軸。

噪音(noise)——基線信號的波動。通常因電源接觸不良或瞬時過載、檢測器不穩定、流動相含有氣泡或色譜柱被污染所致。

漂移(drift)——基線隨時間的緩緩變化。主要由于操作條件如電壓、溫度、流動相及流量的不穩定所引起，柱內的污染物或固定相不斷被洗脫下來也會產生漂移。

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高效液相色譜分離原理

離子對

(Ion Pair Chromatography)

離子對色譜法是將一種 ( 或多種 ) 與溶質分子電荷相反的離子 ( 稱為對離子或反離子 ) 加到流動相或固定相中，使其與溶質離子結合形成疏水型離子對化合物，從而控制溶質離子的保留行為。其原理可用下式表示：X水相Y-水相 === X Y-有機相

式中：X 水相--流動相中待分離的有機離子（也可是陽離子）；Y-水相--流動相中帶相反電荷的離子對（如氫氧化四丁基銨、氫氧化十六烷基三甲銨等）；X Y---形成的離子對化合物。

當達平衡時：

KXY = [X Y-]有機相/[ X ]水相[Y-]水相

根據定義，分配系數為：

DX= [X Y-]有機相/[ X ]水相= KXY [Y-]水相

[討論：DX與保留值的關系]

離子對色譜法（特別是反相）解決了以往難以分離的混合物的分離問題，諸如酸、堿和離子、非離子混合物，特別是一些生化試樣如核酸、核苷、生物堿以及藥物等分離。

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高效液相色譜相關術語

峰面積(peak area，A)—峰與峰底所包圍的面積。

保留時間(retention time，tR)——從進樣開始到某個組分在柱后出現濃度極大值的時間。

理論塔板數(theoretical plate number，N)——用于定量表示色譜柱的分離效率（簡稱柱效）。

分離度(resolution，R)——相鄰兩峰的保留時間之差與平均峰寬的比值。也叫分辨率，表示相鄰兩峰的分離程度。R≥1.5稱為完全分離。

《中國藥典》規定R應大于1.5。

拖尾因子(tailing factor，T)——T=，用以衡量色譜峰的對稱性。也稱為對稱因子(symmetry factor)或不對稱因子(asymmetry factor)。

《中國藥典》規定T應為0.95~1.05。

T1.05為拖尾峰。

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Vanquish Duo 系統可采用多種分析檢測器，包括質譜（MS）、二極管陣列檢測（DAD）、電霧式檢（CAD）、可變波長檢測（VWD）和熒光檢測（FLD）。

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保持實驗室整潔

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正反色譜

正相色譜法

采用極性固定相（如聚乙二醇、氨基與腈基鍵合相）；流動相為相對非極性的疏水性溶劑（烷烴類如正已烷、環已烷），常加入乙醇、異丙醇、四氫呋喃、三氯甲烷等以調節組分的保留時間。常用于分離中等極性和極性較強的化合物（如酚類、胺類、羰基類及氨基酸類等）。

反相色譜法

一般用非極性固定相（如C18、C8)；流動相為水或緩沖液，常加入甲醇、乙腈、異丙醇、**、四氫呋喃等與水互溶的有機溶劑以調節保留時間。適用于分離非極性和極性較弱的化合物。RPC在現代液相色譜中應用**為***，據統計，它占整個HPLC應用的80%左右。

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