細胞外基質的作用:1.決定細胞的形狀體外實驗證明,各種細胞脫離了細胞外基質呈單個游離狀態時多呈球形。同一種細胞在不同的細胞外基質上粘附時可表現出完全不同的形狀。上皮細胞粘附于基膜上才能顯現出其極性。細胞外基質決定細胞的形狀這一作用是通過其受體影響細胞骨架的組裝...
鼠尾Ⅰ型膠原:組裝液的配置:1.50mmol/L甘氨酸+200mmol/L氯化鉀100mL,用1mol/L氫氧化鈉調節酸堿度至9.2。2.膠原纖維的重構吸取膠原10μL至小培養皿中,倒入0.5mL自組裝液,室溫放置20min。予自組裝液自組裝24h。吸取0.0...
由于這些核酸被囊膜包裹而被保護,穩定性高,不易降解,是一種用于一些病癥診斷和預后監測的非常理想的新型生物標記物一些疾病的早期診斷、用藥監控、預后判斷。近年來,隨著人們對外泌體的研究和認識加深,外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術已被許多臨床科研機構普遍地應...
含細胞三維膠原凝膠的制備(以配制1mg/mL三維膠1mL為例)準備好懸浮于培養液的細胞,并放置于冰浴中。將200μL本品加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠...
膠原蛋白的功效與作用:1、可以作為一種補鈣食品。膠原蛋白的特征氨基酸羥基脯氨酸是血漿中運輸鈣到骨細胞的運載工具,骨細胞中的骨膠原是羥基磷灰石的黏合劑,它與羥摹磷灰石共同構成了骨骼的主體。因此,只要攝入足夠的膠原蛋白,就能保證正常機體鈣質的攝入量,膠原蛋白可成制...
細胞外基質生理學功能:趨硬性:硬度和彈性也引導細胞遷移,這一過程被稱為趨硬性(durotaxis)。該術語是由LoCM及其同事創造的,當時他們發現單細胞傾向于向剛性梯度上遷移(朝向更硬的基底))[此后趨硬性一直被普遍研究。趨硬性背后的分子機制被認為主要存在于黏...
鼠尾膠原包被培養板:胎干細胞在體外可誘導分化為血管內皮細胞,進而形成血管,因而成為血管組織工程理想的種子細胞來源之一。目的:探討建立定向誘導人胚胎干細胞向血管內皮細胞分化的方法。方法:在小鼠胚胎成纖維細胞飼養層上培養人胚胎干細胞H1,將H1細胞團塊轉移到鼠尾膠...
構成細胞外基質的大分子:膠原collagen膠原是動物體內含量較豐富的蛋白質,約占人體蛋白質總量的30%以上。它遍布于體內各種部位和組織,是細胞外基質中的框架結構,可由成纖維細胞、軟骨細胞、成骨細胞及某些上皮細胞合成并分泌到細胞外。目前已發現的膠原至少有19種...
細胞凍存注意事項:離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養瓶中進行培養,第二天換液。因為離心的目的是兩個,去除DMSO,去除死細胞,這個是標準流程,但對一般人來說,把握不好離心轉速和時間,轉的不夠活細胞沉底的少,細胞就全被扔...
基質:曾稱為“一種分析物(analyte)的環境(milieu)”,即指標本中除分析物以外的一切組成。以血清膽固醇(Chol)測定而言,就是指Chol以外血清中的一切成分及其物理、化學性質。基質是由生物大分子構成的無定形膠狀物,無色透明,具有一定黏性,孔隙中有...
鼠尾膠原使用方法:1、細胞培養器皿的表面包被以包被濃度為2μg/cm2為例,用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL。加到相應的培養器皿中,確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面。開蓋在超凈臺上過夜晾干,也可以在室溫放置1小時后,用PBS洗3...
細胞外基質的主要類型及功能:對人類細胞的研究表明,細胞外基質中的纖粘蛋白主要由成纖維細胞、上皮細胞等分泌并附著在細胞表面,其作用是促進細胞對基質的貼附,細胞之間的粘著,細胞內微絲及應力纖維的構建。觀察到轉化的體外培養的成纖維細胞,表面纖維蛋白量減少,與此相關地...
大量關于一些病癥相關巨噬細胞的研究表明,一些病癥相關巨噬細胞通過與一些病癥細胞進行細胞間通訊,與一些病癥進展和轉移相關,然而對TAM與一些病癥細胞之間通信的研究限制于可溶性因子,例如促炎細胞因子,其中包括趨化因子、炎癥因子和生長因子等。較近的研究證據表明,外泌...
細胞外基質蛋白聚糖(proteoglycan):蛋白聚糖是氨基聚糖(除透明質酸外)與*蛋白質(coreprotein)的共價結合物。*蛋白質的絲氨酸殘基(常有Ser-Gly-X-Gly序列)可在高爾基復合體中裝配上氨基聚糖(GAG)鏈。其糖基化過程為通過逐個轉...
細胞外基質氨基聚糖與蛋白聚氨基聚糖(glycosaminoglycan,GAG)GAG是由重復二糖單位構成的無分枝長鏈多糖。其二糖單位通常由氨基已糖(氨基葡萄糖或氨基半乳糖)和糖醛酸組成,但硫酸角質素中糖醛酸由半乳糖代替。氨基聚糖依組成糖基、連接方式、硫酸化程...
細胞外基質的成分:構成細胞外基質的大分子種類繁多,可大致歸納為四大類:膠原、非膠原糖蛋白、氨基聚糖與蛋白聚糖、以及彈性蛋白。上皮組織、肌組織及腦與脊髓中的ECM含量較少,而結締組織中ECM含量較高。細胞外基質的組分及組裝形式由所產生的細胞決定,并與組織的特殊功...
例如,成纖維細胞在纖粘連蛋白基質上增殖加快,在層粘連蛋白基質上增殖減慢;而上皮細胞對纖粘連蛋白及層粘連蛋白的增殖反應則相反。細胞外基質的作用:細胞外基質不只具有連接、支持、保水、抗壓及保護等物理學作用,而且對細胞的基本生命活動發揮較全的生物學作用。影響細胞的存...
細胞外基質的組成可分為三大類:①糖胺聚糖(glycosaminoglycans)、蛋白聚糖(proteoglycan),它們能夠形成水性的膠狀物,在這種膠狀物中包埋有許多其它的基質成分;②結構蛋白,如膠原和彈性蛋白,它們賦予細胞外基質一定的強度和韌性;③粘著蛋...
彈性蛋白:生物組織中彈性較大的結構蛋白。較大量存在于韌帶、血管壁和皮膚等彈性組織中,是彈性纖維的主要成分。能拉長到原長度的幾倍,在張力松弛后很快恢復到原來的大小和形狀。具有高彈性的原因是由于在彈性蛋白形成過程中,賴氨酸殘基間發生了交聯;并且只有在銅離子存在下交...
如何理解細胞外基質影響細胞的粘附過程:影響細胞的存活、生長與死亡正常真核細胞,除成熟血細胞外,大多須粘附于特定的細胞外基質上才能克制凋亡而存活,稱為定著依賴性.例如,上皮細胞及內皮細胞一旦脫離了細胞外基質則會發生程序性死亡.此現象稱為凋亡.不同的細胞外基質對細...
ECM與腎臟纖維化:各種原發性和/或繼發性致病原因所導致ECM合成與降解的動態失衡,促使大量ECM積聚而沉積于腎小球、腎間質內,導致腎臟各級血管堵塞,混亂分隔形成腎臟組織形態學改變,較終導致腎單位喪失,腎功能衰竭,進一步發展成為不可逆轉的腎小球硬化,細胞外基質...
外泌體的提取方法:1、磁珠免疫法。外泌體表面有其特異性標記物(如CD63、CD9蛋白),用包被抗標記物抗體的磁珠與外泌體囊泡孵育后結合,即可將外泌體吸附并分離出來。磁珠法具有特異性高、操作簡便、不影響外泌體形態完整等優點,但是效率低,外泌體生物活性易受pH和鹽...
鼠尾膠原蛋白的提取方法:1.一種生物醫用鼠尾膠原蛋白的提取方法,其特征在于,包括以下步驟:(1)將無組織纖維、脂肪和多糖殘留的鼠尾腱,真空冷凍干燥備用;(2)凍干鼠尾腱經低溫凍干粉碎至200?400目;(3)在冰水浴中將粉碎的鼠尾腱在醋酸溶液中溶脹,鼠尾腱與醋...
什么是細胞外基質(ECM):多細胞生物,不光由細胞組成,還包括分布于細胞外空間的細胞外基質(ECM)。細胞外基質(ECM)由三維網構成,除了蛋白聚糖和葡糖胺聚糖,膠原蛋白,彈力蛋白和基礎纖維之外,在這個空間里還有血管,淋巴管和神經末梢,防御細胞和基底膜。ECM...
細胞凍存及復蘇的基本原則是“慢凍快融”,這樣可以較大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多用二甲基亞砜(DMSO)作為保護劑,這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性;緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外,減少細胞內冰晶的形成,從而減少冰晶對細胞的物理損傷。復蘇細胞采用快...
RNA提取試劑的選擇:首先,要確定材料的可用性。盡管現有的RNA提取試劑都用壓制RNase的成分,但提取的材料仍需謹慎處理。提取的材料的新鮮度是獲取完整RNA的關鍵,但是由于種種原因無法立即從新鮮材料中提取RNA時,使用Takara公司的樣品保護劑Sample...
凍存細胞復蘇方法:1.從冰箱里取出細胞冷凍保存管,立即放入37℃振動水浴槽中快速解凍。2.待凍存管中細胞混合液完全融化后,立即加入1ml細胞培養基于該冷凍管中與細胞混合,再將細胞混合液從凍存管中移入含有9ml該細胞培養基的試管中,混合均勻。3.離心收集培養細胞...
RNA提取:預備工作RNA酶(Rnase)是導致RNA降解較主要的物質。此酶非常穩定,在一些極端的條件下只可暫時失活,但限制因素去除后又迅速恢復活性。常規高溫高壓滅菌方法和蛋白壓制劑不能使所有的Rnase完全失活。1.它普遍存在于人的皮膚上,因此制備RNA時必...
冷凍速率:冷凍速率是指降溫的速度,直接關系到冷凍效果。冷凍速度不同,細胞內水分向外流動的情況也不相同,不同的冷凍速度既然能使細胞內發生不同的生理變化,也可以對細胞產生不同的損傷。超快速玻璃化冷凍對細胞存活來說是較為理想的冷凍方法。細胞內外呈玻璃化凝固,無冰晶形...
總RNA的定義:總RNA=mRNA+tRNA+rRNA,即:總RNA就是指mRNA、tRNA、rRNA的總和。這是在還沒有發現lncRNA等microRNA的時候的概念。但是卻被各大公司默認的概念,一直延續至今。所以各位可以去各大公司的網站,看一看總RNA提取...