1993年,美國科學(xué)家Mulis眾望所歸地獲得了諾貝爾化學(xué)獎,他所取得的成就是發(fā)明了PCR技術(shù)。PCR,中文譯為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),其實是一種DNA的快速擴增技術(shù),其擴增效率之高就象核裂變的“鏈?zhǔn)椒磻?yīng)”那樣。PCR技術(shù)通過兩個短的稱為引物的DNA小片段和一種耐熱的酶的作用,可以在3個小時內(nèi)把特定的DNA量提高1000萬倍。這種技術(shù)一問世,立刻引起了分子生物學(xué)研究的一場**,人們利用這種轟動全世界的技術(shù)很快就把微觀領(lǐng)域的生物學(xué)研究地往前推了一步??梢赃@么說,PCR技術(shù)使分子生物學(xué)研究一下子獲得了突破,而且隨著PCR技術(shù)的日趨完善,PCR在人類社會生活中的應(yīng)用也越來越。比如說在“DNA指紋”中我們提到,科學(xué)家們只需要一根頭發(fā)甚至一個細胞就可以完成DNA指紋的鑒定工作,這里實際上就要采用PCR技術(shù),因為一個細胞中的DNA含量實在太少了,人們根本不可能檢測到它的指紋;有了PCR技術(shù)就好辦了,通過PCR技術(shù)把這個細胞中的DN斷擴增1000萬倍,這樣DNA量就足夠作指紋鑒定了。再比如,在醫(yī)院里檢驗血液中的某種病毒,有時病毒量極少(例如病毒攜帶者),通過傳統(tǒng)的檢查方法費力又費時,這時PCR技術(shù)也許就可以幫上忙??梢韵冗x定這種病毒DNA上的一段DNA,設(shè)計合適的引物DNA。 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)是一種用于放大擴增特定DNA的分子生物學(xué)技術(shù),它可看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制.上海力康基因擴增PCR儀價格便宜
它能降解特異性熒光記探針,因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能。(2)此后熒光雙標(biāo)記探針的運用使在一密閉的反應(yīng)管中能實時地監(jiān)測反應(yīng)全過程。這兩個發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展導(dǎo)致real-timeQ-PCR方法在研究工作中的運用。PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)方式生成模板,從而進入平臺期。在傳統(tǒng)的PCR中,常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測PCR反應(yīng)的終擴增產(chǎn)物,因此用此終點法對PCR產(chǎn)物定量存在不可靠之處。在real-timeQ-PCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的監(jiān)測和連續(xù)地分析擴增相關(guān)的熒光信號,隨著反應(yīng)時間的進行,監(jiān)測到的熒光信號的變化可以繪制成一條曲線。在PCR反應(yīng)早期,產(chǎn)生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別,而后熒光的產(chǎn)生進入指數(shù)期、線性期和終的平臺期,因此可以在PCR反應(yīng)處于指數(shù)期的某一點上來檢測PCR產(chǎn)物的量,并且由此來推斷模板初的含量。為了便于對所檢測樣本進行比較,在real-timeQ-PCR反應(yīng)的指數(shù)期,首先需設(shè)定一定熒光信號的域值,一般這個域值(threshold)是以PCR反應(yīng)的前15個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號(baseline)。 上海國產(chǎn)PCR儀廠家直銷價實時熒光定量PCR儀主要應(yīng)用于臨床醫(yī)學(xué)檢測、生物醫(yī)藥研發(fā)、食品行業(yè)、科研院校等。
PCR基因擴增法在遺傳性疾病產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用,遺傳病是由于遺傳物變化而引起的機體某一功能或缺陷或異常所致的疾病,其根本變化在于遺傳物質(zhì)。地中海貧血(Thalassemia)是一種遺傳性慢性溶血性貧血病,是世界上常見且發(fā)病比高的一種單基因遺傳病。在兩廣、貴州、四川等地發(fā)病率較高,在廣西等地高達15%。地中海貧血是由于基因突變造成珠蛋白的不平衡,使結(jié)構(gòu)正常的肽鏈合成量減少甚至沒有合成表現(xiàn)為溶血性貧血。接受累基因種類分為α、β、γ等,其中以α、β地貧為常見,危害了大。珠蛋白基因簇位于人6號染色短臂上,有兩個重復(fù)基因基因位于α1、α2、兩個α基因及其旁側(cè)序列有很大的同源性,易出現(xiàn)染色體不等交換,導(dǎo)致α基因缺失-α地貧。α地貧基因部分缺失有α1基因部分缺失、α2基因缺失、α1及α2基因同時缺失及非缺失型地貧。可以應(yīng)用PCR技術(shù)擴增α1、α2基因從而檢測這些基因是否缺失、突變等,從而對α型地中海貧血作出診斷。β地中海貧血基因缺陷主要表現(xiàn)為基因序列中單一核苷酸的突變,或少數(shù)堿基的缺失、插入,使正常β珠蛋白肽鏈合成減注或缺失。應(yīng)用位點特異性寡核苷探針(Aso)進行PCR產(chǎn)物斑點雜交即可對其作出診斷。
熒光定量PCR儀因操作方便、運行速度快、實驗結(jié)果準(zhǔn)確,受到越來越多的分子生物學(xué)研究者青睞。在實驗技術(shù)成熟的現(xiàn)今,難得不是實驗技術(shù)上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀——你要征詢實驗室成員的意見、分析實驗室目前乃至將來的需求、平衡實驗室的預(yù)算,更要詳細研究各種極富誘惑力的宣傳資料。面對各種不同性能的產(chǎn)品,您又該如何選擇呢?首先建議大家走出認(rèn)識熒光定量PCR的兩個誤區(qū):誤區(qū)一:儀器通道越多越好隨著PCR技術(shù)的成熟運用,多重擴增越來越熱鬧,熒光定量PCR儀也不能幸免。在使用有些廠家5通道的熒光定量儀時,為了確保實驗結(jié)果的精確性和準(zhǔn)確性都要在實驗中使用ROX(一種熒光染料)或Referencedye,這些熒光染料都必須單獨使用一個檢測通道。這樣以來,真正能檢測多重PCR熒光信號的有效通道只有4個,而且使用校正染料可能會增加后期的使用成本??紤]多重?zé)晒舛縋CR的通道數(shù)的時候也應(yīng)該從實驗室實際情況出發(fā),多重PCR并非人人適用、人人可用,因為它使實驗復(fù)雜化了。誤區(qū)二:real-timePCR儀無需梯度功能對于使用染料法的定量PCR反應(yīng),雖然有各種各樣的PCR引物設(shè)計軟件或者經(jīng)驗公式計算熔解溫度(Tm值),但運用的公式不同、引物序列不同。PCR技術(shù)的基本原理類似于DNA的天然復(fù)制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物.
3).無創(chuàng)產(chǎn)前檢查鐮狀細胞貧血(sicklecellanemia)是HBB基因突變引起的常染色體顯性遺傳病,有嚴(yán)重的危害,可以導(dǎo)致高達5%的胎兒死亡率及。而有效的無創(chuàng)產(chǎn)前診斷是預(yù)防鐮狀細胞貧血患兒出生的有效方法。研究人員采用dPCR技術(shù)檢測孕婦胎兒游離DNA(cff-DNA)HBB基因突變。結(jié)果顯示,dPCR技術(shù)能夠確定87%的男性胎兒(n=45)和75%的女性胎兒(n=20)HBB基因的突變狀態(tài)。當(dāng)cff-DNA濃度大于7%時,可以100%的檢測出HBB基因突變[3],可以說是相當(dāng)厲害了。Nacia數(shù)字PCRNaica數(shù)字PCR系統(tǒng)——簡便、快速地完成3通道檢測Naica數(shù)字PCR系統(tǒng)是法國Stilla公司開發(fā)的下一代核酸定量技術(shù)。使用cutting-edge微流體創(chuàng)新型芯片——Sapphire芯片作為數(shù)字PCR過程的耗材。樣品通過毛細通道網(wǎng)格以30,000個微滴的形式進入2D芯片中,可稱作Crystal微滴。Naica數(shù)字PCR擴增實驗在芯片上實現(xiàn)。對微滴成像用以檢測包含擴增片段的微滴。一步是對陽性微滴計數(shù)從而得到的核酸數(shù)量。Naica數(shù)字PCR,結(jié)合了強大的圖像分析技術(shù)和直觀可視的檢測功能,從而達到了數(shù)字PCR定量的置信水平,獲得的數(shù)據(jù)真實可信。 PCR的三個反應(yīng)(變性-退火-延伸)0步驟反復(fù)進行,使DNA擴增量呈指數(shù)上升。國產(chǎn)品牌PCR儀廠家供應(yīng)
而核酸檢測方法中,PCR儀無疑是本次臨床檢測的關(guān)鍵利器。上海力康基因擴增PCR儀價格便宜
力康GM05智能梯度基因擴增儀(控溫儀)性能特點:高清晰超大7寸液晶顯示屏-可選鍍金/鍍銀模塊,提高熱傳導(dǎo)效率,使實驗更高效;方便靈活的模塊更換裝置,輕松更換模塊;熱蓋旋鈕無級可調(diào),適用各型號試管;樣品座工作區(qū)域全密閉設(shè)計,可確保低溫保存干燥清潔;可任意角度定位熱蓋;具備斷電記憶功能;環(huán)境溫度自動讀取,自動修正溫控誤差;支持用戶實驗預(yù)約設(shè)定,鬧鐘提醒功能;支持程序搜索功能,支持常用程序優(yōu)先選擇功能;支持多重嵌套循環(huán);支持梯度PCR、TouchdownPCR、LongPCR設(shè)定;可外接移動硬盤和鼠標(biāo),支持觸摸和鼠標(biāo)操作;可實現(xiàn)遠程故障判斷;具有TM值計算功能,可更好地幫助用戶進行引物設(shè)計;可單獨配備PC機操作軟件,PC機與主機可分別各自控制,并實現(xiàn)一機多控。上海力康基因擴增PCR儀價格便宜
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