目前,采用熒光定量PCR檢測技術可以對淋球菌、沙眼衣原體、解脲支原體、人類瘤病毒、單純皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、結核分枝桿菌、EB病毒和巨細胞病毒等病原體進行定量測定。與傳統的檢測方法相比具有靈敏度高、取樣少、快速簡便等優點。如:結核菌基因診斷的意義主要表現在:a.區分TB與其它分枝桿菌;b.檢測TB耐藥基因;c.提高TB的陽性檢出率。⑵產前診斷到目前為止,人們對遺傳性物質改變引起的遺傳性疾病還無法,只能通過產前監測,減少病嬰出生,以防止各類遺傳性疾病的發生,如為減少X連鎖遺傳病患兒的出生,從孕婦的外周血中分離胎兒DNA,用實時熒光定量PCR檢測其Y性別決定區基因是一種無創傷性的方法,易為孕婦所接受。⑶藥物療效考核對乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)定量分析顯示:病毒量與某些藥物的療效關系。HCV高水平表達,干擾素作用不敏感,而HCV低滴度,干擾素作用敏感;在拉米夫定過程中,HBV-DNA的血清含量曾有下降,隨后若再度上升或超出以前水平,則提示病毒發生變異。如PCR技術在HBV檢測中的應用及意義:a.了解乙肝病毒在體內存在的數量。b.是否復制。c.是否傳染,傳染性有多強。d.是否有必要服藥。 熒光定量PCR儀是以熒光染料或熒光標記探針偵測每次聚合酶鏈鎖反應(PCR)循環后產物總量。國產高校科研PCR儀生產廠家
1.一般性原則(1)長度:一般引物互補區的長度為16-25bp,引物互補區的4×(G十C)十2×(A十T)不要沒有必要大于70,一般也不要低于50(2)G十c含量:好在45%一55%之間,但有時受模板限制,無法理想化。但在有幾種選擇時,可以把G十c含量接近50%作為參數之一(3)堿基分布的隨機性:應避免連續出現4個以上的單一堿基。尤其是不應在其3’端出現超過3個的連續G或C,否則會使引物在G十C富集序列區錯誤引發。(4)引物自身:不能含有很長的牢固的自身互補序列,尤其是引物3‘端回折形成的發夾不要一般超過3堿基,否則會影響引物與模板的結合(5)引物之間:兩個引物之間不應有很長的牢固的互補或同源堿基,尤應避免3’端的互補重疊。2.具體原則①引物長度;特異性一般通過引物長度和退火溫度控制。如果PCR的退火溫度設置在近于引物Tm值(引物/模板雙鏈體的解鏈溫度)幾度的范圍內,18到24個堿基的寡核苷酸鏈是有很好的序列特異性的。引物越長,擴增退火時被引發的模板越少。為優化PCR反應,使用確保溶解溫度不低于54℃的短的引物,可獲得好的效率和特異性。總的來說,好在特異性允許的范圍內尋求安全性。每增加一個核苷酸,引物特異性提高4倍;這樣,大多數應用的短引物長度為18個核苷酸。 實時定量PCR儀銷售電話PCR實驗室又叫“基因擴增實驗室”,根據規定需有生物安全柜等防護設備及熒光定量PCR儀等檢測設備。
1993年,美國科學家Mulis眾望所歸地獲得了諾貝爾化學獎,他所取得的成就是發明了PCR技術。PCR,中文譯為聚合酶鏈式反應,其實是一種DNA的快速擴增技術,其擴增效率之高就象核裂變的“鏈式反應”那樣。PCR技術通過兩個短的稱為引物的DNA小片段和一種耐熱的酶的作用,可以在3個小時內把特定的DNA量提高1000萬倍。這種技術一問世,立刻引起了分子生物學研究的一場**,人們利用這種轟動全世界的技術很快就把微觀領域的生物學研究地往前推了一步。可以這么說,PCR技術使分子生物學研究一下子獲得了突破,而且隨著PCR技術的日趨完善,PCR在人類社會生活中的應用也越來越。比如說在“DNA指紋”中我們提到,科學家們只需要一根頭發甚至一個細胞就可以完成DNA指紋的鑒定工作,這里實際上就要采用PCR技術,因為一個細胞中的DNA含量實在太少了,人們根本不可能檢測到它的指紋;有了PCR技術就好辦了,通過PCR技術把這個細胞中的DN斷擴增1000萬倍,這樣DNA量就足夠作指紋鑒定了。再比如,在醫院里檢驗血液中的某種病毒,有時病毒量極少(例如病毒攜帶者),通過傳統的檢查方法費力又費時,這時PCR技術也許就可以幫上忙。可以先選定這種病毒DNA上的一段DNA,設計合適的引物DNA。
血友病是一組**為常見的遺傳性凝血障礙,根據因子缺陷的不同分為甲、乙兩型,(Ⅷ、Ⅸ因子缺陷),也有復合型血友病,但不常見。甲型血友病發病率為1/10000,Ⅷ因子基因位于G6PD基因附近,全長186Kb,大范圍的基因重排(缺失、插入、重復)導致甲型血友病的病例很少,*為Ⅷ因子缺陷的5%,大部分病人表現為單個或少數堿基的突變。由于Ⅷ因子基因長度為186Kb,突變位點多,而且新生突變頻率高,從臨床角度講不能對每一個突變都檢測,可對**為常見的幾種突變類型進行檢測,主要的檢測手段是PCR結合RELP分析。乙型血友病發病率占血友病的20%,其基因變化及檢測方法與甲型血友病類似。區別雄性及雌性的物質基礎是性染色體,哺乳動物胚胎發育中,雌性表型不需要任何調節,而雄性表型則由多因素決定,位于Y染色體上的指導雄性性別分ss化的基因命名為睪丸決定因子(TDF)。現代研究表明,SRY(Sex-determiningregionofYchromosome)基因是TDF基因,位于Y染以體短臂末端。SRY區缺失易導致46XY核型個體發育成女性。進行基因檢測可以檢出SRY基因組的易位及缺失,從而診斷性別發育異常,這一探索性別異常的研究非常熱門。另外還有一種46XY核型異常的病人即睪丸女性化,這是用于雄***受體。 PCR技術起初的臨床應用就是從檢測鐮狀細胞和β-地中海貧血的基因突變開始的。
移動箱式PCR實驗室嚴格按照生物安全實驗室的標準建造,配備有各類儀器設備,注重保障實驗人員安全,同時具備機動靈活、反應迅速等特點,協助前線醫院開展檢測工作,為防控奉獻綿薄之力。由于集裝箱在出廠前已經完成了單個箱體里面配置的所有安裝,水、電、風、廢水和廢氣排放等系統已經在箱體配備,同時保證了外面環境的安全。在現場基礎平整的條件下,只需要簡單的進行箱體吊裝安放、給水和用電對接即可——在極端情況下甚至可以在無水無電的情況下短時運行,真正做到組裝迅速。對接安裝本身不需要非常專業的人員,常規的疾控維修人員或工程人員就可以完成對接。箱體安放位置一般在室外,對于病人的隔離或控制病毒擴散都是有利的。室外空氣流通快,不會像室內空氣那樣高度聚集及停留產生氣溶膠導致病毒擴散的風險加大,箱式PCR實驗室有效的避免了聚集性和傳染性,當箱式PCR實驗室內部環境受到污染時,可以快速通過送排風系統置換新鮮的空氣達到實驗室凈化的要求。箱式PCR實驗室可以重復使用,當結束以后,經過專業人員的消毒,可以重新運到疾控中心、醫院、港口或者第三方檢測等單位再次使用,也可經過專業存放和維護,待需要時重新投入使用。而核酸檢測方法中,PCR儀無疑是本次臨床檢測的關鍵利器。熒光定量PCR儀生產廠家
PCR可檢測不同細胞類型、組織和生物體在特定時間點的基因表達差異。國產高校科研PCR儀生產廠家
并含有能用于探針捕捉雜交實驗的足夠信息。這一長度范圍的產物可以通過采用兩步擴增循環方法得到,從而減少擴增時間。其他PCR方法有不同的佳產物長度。例如,通過定量的RNA-PCR檢測基因表達時,產物應該足夠大以便構成競爭性模板,這樣,產物和競爭物都能夠在凝膠上很容易的分辨出來。這些產物一般在250~750bp范圍內。⑦補充說明若在cDNA序列內找尋PCR引物,需特別注意兩點:首先,盡力將引物和產物保持在mRNA的編碼區域內,因為這是生成蛋白質的獨特序列,不像3’末端非編碼區域與許多其他mRNA有同源性;第二,盡力把引物放在不同的外顯子上,以便使RNA特異的PCR產物與從污染DNA中產生的產物在大小上相區別。若PCR的目的是克隆一個基因或cDNA的特異序列,產物的大小是根據具體應用預選的。在這里,計算機程序可以提供關于期望區域側翼選擇引物對的信息。在選擇用來擴增來自不同物種DNA的引物時,應避開mRNA的5’和3’末端非翻譯區序列,因為它們可能沒有任何的同源性。3.簡并引物設計①設計簡并引物時,一定要檢查靶擴增區域選定氨基酸遺傳密碼的簡并度。很顯然,我們期望選擇簡并度低的氨基酸,達到提高特異性的目的。②充分注意物種對于密碼子的偏好性。 國產高校科研PCR儀生產廠家
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