PCR（聚合酶鏈式反應）是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈，低溫（經常是60°C左右）時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合，再調溫度至DNA聚合酶適反應溫度（72°C左右），DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。PCR儀實際就是一個溫控設備，能在95℃，55℃，72℃之間很好地進行溫度控制。PCR擴增儀又稱為PCR基因擴增儀、PCR核酸擴增儀、聚合酶鏈反應核酸擴增儀，是利用PCR(Polymerasechainreaction，聚合酶鏈反應)技術對特定DNA擴增的一種儀器設備，被運用于醫學、生物學實驗室中，例如用于判斷檢體中是否會表現某遺傳疾病的圖譜、傳染病的診斷、基因復制以及親子鑒定等。 DNA的半保留復制是生物進化和傳代的重要途徑。實時熒光PCR儀詢問報價

    目前，采用熒光定量PCR檢測技術可以對淋球菌、沙眼衣原體、解脲支原體、人類瘤病毒、單純皰疹病毒、人類免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、結核分枝桿菌、EB病毒和巨細胞病毒等病原體進行定量測定。與傳統的檢測方法相比具有靈敏度高、取樣少、快速簡便等優點。如：結核菌基因診斷的意義主要表現在：a.區分TB與其它分枝桿菌；b.檢測TB耐藥基因；c.提高TB的陽性檢出率。⑵產前診斷到目前為止，人們對遺傳性物質改變引起的遺傳性疾病還無法，只能通過產前監測，減少病嬰出生，以防止各類遺傳性疾病的發生，如為減少X連鎖遺傳病患兒的出生，從孕婦的外周血中分離胎兒DNA，用實時熒光定量PCR檢測其Y性別決定區基因是一種無創傷性的方法，易為孕婦所接受。⑶藥物療效考核對乙型肝炎病毒(HBV)、丙型肝炎病毒(HCV)定量分析顯示：病毒量與某些藥物的療效關系。HCV高水平表達，干擾素作用不敏感，而HCV低滴度，干擾素作用敏感；在拉米夫定過程中，HBV-DNA的血清含量曾有下降，隨后若再度上升或超出以前水平，則提示病毒發生變異。如PCR技術在HBV檢測中的應用及意義：a.了解乙肝病毒在體內存在的數量。b.是否復制。c.是否傳染，傳染性有多強。d.是否有必要服藥。 實時熒光PCR儀詢問報價PCR技術的基本原理類似于DNA的天然復制過程，其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物.

    基因擴增儀因操作方便、運行速度快、實驗結果準確，受到越來越多的分子生物學研究者青睞。面對各種不同性能的基因擴增儀，又該如何選擇呢?基因擴增儀的選購誤區誤區一：儀器通道越多越好隨著基因擴增技術的成熟運用，多重擴增越來越熱鬧，基因擴增儀也不能幸免。從單通道基因擴增儀發展到如今各個廠家都推出4通道、5通道甚至6通道基因擴增儀，眼花繚亂的選擇讓人無所適從，就有人一不小心走進了“通道越多越好”的誤區。在使用有些廠家5通道的基因擴增儀時，為了確保實驗結果的精確性和準確性都要在實驗中使用ROX或Referencedye，這些熒光染料都必須單獨使用一個檢測通道。這樣以來，真正能檢測多重PCR熒光信號的有效通道只有4個，而且使用校正染料可能會增加后期的使用成本。考慮多重基因擴增儀的通道數的時候也應該從實驗室實際情況出發，多重基因擴增儀并非人人適用、人人可用，因為它使實驗復雜化了。誤區二：基因擴增儀無需梯度功能對于使用染料法的定量PCR反應，雖然有各種各樣的PCR引物設計軟件或者經驗公式計算熔解溫度(Tm值)，但運用的公式不同、引物序列不同，Tm值的差異會很大。引物的熔解溫度決定了退火溫度。而且模版中堿基的組合千變萬化，對于特殊片斷。

    1．一般性原則(1)長度：一般引物互補區的長度為16-25bp，引物互補區的4×(G十C)十2×(A十T)不要沒有必要大于70，一般也不要低于50(2)G十c含量：好在45％一55％之間，但有時受模板限制，無法理想化。但在有幾種選擇時，可以把G十c含量接近50%作為參數之一(3)堿基分布的隨機性：應避免連續出現4個以上的單一堿基。尤其是不應在其3’端出現超過3個的連續G或C，否則會使引物在G十C富集序列區錯誤引發。(4)引物自身：不能含有很長的牢固的自身互補序列，尤其是引物3‘端回折形成的發夾不要一般超過3堿基，否則會影響引物與模板的結合(5)引物之間：兩個引物之間不應有很長的牢固的互補或同源堿基，尤應避免3’端的互補重疊。2.具體原則①引物長度；特異性一般通過引物長度和退火溫度控制。如果PCR的退火溫度設置在近于引物Tm值（引物/模板雙鏈體的解鏈溫度）幾度的范圍內，18到24個堿基的寡核苷酸鏈是有很好的序列特異性的。引物越長，擴增退火時被引發的模板越少。為優化PCR反應，使用確保溶解溫度不低于54℃的短的引物，可獲得好的效率和特異性。總的來說，好在特異性允許的范圍內尋求安全性。每增加一個核苷酸，引物特異性提高4倍；這樣，大多數應用的短引物長度為18個核苷酸。 基于聚合酶制造的PCR儀實際就是一個溫控設備，能在變性溫度，復性溫度，延伸溫度之間很好地進行控制。

    PCR實驗室又叫基因擴增實驗，是一種分子生物學技術，用于放大特定的DNA的片段，可看作生物體外的特殊DNA復制。通過DNA基因追蹤系統，能迅速掌握生物體內的病毒含量，其精確度高達納米級別。PCR實驗室運行的條件1、必須擁有標準的的PCR熒光實驗室實時熒光定量PCR技術于1996年由美國AppliedBiosystems公司推出，由于該技術不實現了PCR從定性到定量的飛躍，而且與常規PCR相比，它有特異性更強、有效解決PCR污染問題、自動化程度高等特點，目前已得到廣泛應用。2、檢測設備必須符合標準PCR熒光實驗室設置要求熒光定量PCR儀+實時熒光定量試劑+通用電腦+自動分析軟件，構成PCR-DNA/RNA實時熒光定量檢測系統。3、必須通過國家臨床檢驗中心的驗收和認證;4、檢測人員必須通過國家臨檢中心業務培訓并取得合格證書。PCR實驗室內工作人員必須參加由國家衛生部或各省臨床檢驗中心舉辦的臨床基因擴增培訓班，并持證上崗。PCR實驗室通過驗收，實驗室至少必須應有兩個以上持有“臨床基因檢測上崗證”。PCR實驗室必須建立嚴格的實驗室管理制度、建立標準化操作程序（SOP）、建立系列質量管理文件等。確保實驗室日常運行符合國家衛生部的要求，確保檢測結果準確、確保實驗室衛生安全。只要樣本有一個病原體存在，PCR就可以檢測到。實時熒光PCR儀詢問報價

PCR可檢測不同細胞類型、組織和生物體在特定時間點的基因表達差異。實時熒光PCR儀詢問報價

    并含有能用于探針捕捉雜交實驗的足夠信息。這一長度范圍的產物可以通過采用兩步擴增循環方法得到，從而減少擴增時間。其他PCR方法有不同的佳產物長度。例如，通過定量的RNA-PCR檢測基因表達時，產物應該足夠大以便構成競爭性模板，這樣，產物和競爭物都能夠在凝膠上很容易的分辨出來。這些產物一般在250～750bp范圍內。⑦補充說明若在cDNA序列內找尋PCR引物，需特別注意兩點：首先，盡力將引物和產物保持在mRNA的編碼區域內，因為這是生成蛋白質的獨特序列，不像3’末端非編碼區域與許多其他mRNA有同源性；第二，盡力把引物放在不同的外顯子上，以便使RNA特異的PCR產物與從污染DNA中產生的產物在大小上相區別。若PCR的目的是克隆一個基因或cDNA的特異序列，產物的大小是根據具體應用預選的。在這里，計算機程序可以提供關于期望區域側翼選擇引物對的信息。在選擇用來擴增來自不同物種DNA的引物時，應避開mRNA的5’和3’末端非翻譯區序列，因為它們可能沒有任何的同源性。3．簡并引物設計①設計簡并引物時，一定要檢查靶擴增區域選定氨基酸遺傳密碼的簡并度。很顯然，我們期望選擇簡并度低的氨基酸，達到提高特異性的目的。②充分注意物種對于密碼子的偏好性。 實時熒光PCR儀詢問報價

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