PCR基因擴增法在遺傳性疾病產前診斷中的應用,遺傳病是由于遺傳物變化而引起的機體某一功能或缺陷或異常所致的疾病,其根本變化在于遺傳物質。地中海貧血(Thalassemia)是一種遺傳性慢性溶血性貧血病,是世界上常見且發病比高的一種單基因遺傳病。在兩廣、貴州、四川等地發病率較高,在廣西等地高達15%。地中海貧血是由于基因突變造成珠蛋白的不平衡,使結構正常的肽鏈合成量減少甚至沒有合成表現為溶血性貧血。接受累基因種類分為α、β、γ等,其中以α、β地貧為常見,危害了大。珠蛋白基因簇位于人6號染色短臂上,有兩個重復基因基因位于α1、α2、兩個α基因及其旁側序列有很大的同源性,易出現染色體不等交換,導致α基因缺失-α地貧。α地貧基因部分缺失有α1基因部分缺失、α2基因缺失、α1及α2基因同時缺失及非缺失型地貧。可以應用PCR技術擴增α1、α2基因從而檢測這些基因是否缺失、突變等,從而對α型地中海貧血作出診斷。β地中海貧血基因缺陷主要表現為基因序列中單一核苷酸的突變,或少數堿基的缺失、插入,使正常β珠蛋白肽鏈合成減注或缺失。應用位點特異性寡核苷探針(Aso)進行PCR產物斑點雜交即可對其作出診斷。 PCR儀是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖復制。上海國產PCR儀近期價格
儀器制冷部件可以在完成擴增后降溫至4℃,保存樣品過夜。缺點:管內反應液溫度比鋁塊顯示溫度滯后;須使用特制且與鋁塊凹孔形狀緊密吻合的薄壁耐熱反應管;變溫時難以快速克服鋁塊的熱容量;壓縮機制冷啟動慢、重量大、滯后時間長。2.水浴式PCR儀儀器本身有3個不同溫度的水浴,用機械裝置將帶有反應管的架子移位和升降溫度,使溫度循環。優點:水為傳熱介質,溫度易恒定,熱容量大;反應管形狀無特殊要求,溫度轉換較快擴增效果穩定;具有較高的運行效率,擴增產物特異性好。缺點:高溫浴不穩定,水面需用液體石蠟覆蓋;改變水浴溫度所需時間較長,不易實施復雜程序(如套式PCR)的操作,儀器體積較大;室溫影響溫度下限。3.變溫式流式PCR儀依據空氣流的動力學原理,以冷熱氣流為介質升降溫度。優點:變溫迅速,擴增效果好,適合于微量、快速PCR;反應器不受形狀限制,管外無需涂液體石蠟;測定管內液體溫度作為控溫依據,顯示溫度真實可靠;易于用微電腦設定復雜的變溫程序;易于制成重量較輕的便攜式儀器,適合外出作業。缺點:以室溫為溫度下限,低溫難控制,對空氣流的動力學要求較高,需精心設計才能使各管溫度均勻。 高校科研實驗室國產PCR儀銷售電話只要樣本有一個病原體存在,PCR就可以檢測到。
熒光定量PCR儀因操作方便、運行速度快、實驗結果準確,受到越來越多的分子生物學研究者青睞。在實驗技術成熟的現今,難得不是實驗技術上的問題——而是選擇哪一種熒光定量PCR儀——你要征詢實驗室成員的意見、分析實驗室目前乃至將來的需求、平衡實驗室的預算,更要詳細研究各種極富誘惑力的宣傳資料。面對各種不同性能的產品,您又該如何選擇呢?首先建議大家走出認識熒光定量PCR的兩個誤區:誤區一:儀器通道越多越好隨著PCR技術的成熟運用,多重擴增越來越熱鬧,熒光定量PCR儀也不能幸免。在使用有些廠家5通道的熒光定量儀時,為了確保實驗結果的精確性和準確性都要在實驗中使用ROX(一種熒光染料)或Referencedye,這些熒光染料都必須單獨使用一個檢測通道。這樣以來,真正能檢測多重PCR熒光信號的有效通道只有4個,而且使用校正染料可能會增加后期的使用成本。考慮多重熒光定量PCR的通道數的時候也應該從實驗室實際情況出發,多重PCR并非人人適用、人人可用,因為它使實驗復雜化了。誤區二:real-timePCR儀無需梯度功能對于使用染料法的定量PCR反應,雖然有各種各樣的PCR引物設計軟件或者經驗公式計算熔解溫度(Tm值),但運用的公式不同、引物序列不同。
在普通PCR儀的基礎上增加一個熒光信號采集系統和計算機分析處理系統的PCR儀稱作熒光定量PCR儀。其PCR擴增原理和普通PCR儀擴增原理相同,只是PCR擴增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進行標記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結合擴增。擴增的結果通過熒光信號采集系統實時采集信號連接輸送到計算機分析處理系統得出量化的實時結果輸出。把這種PCR儀叫做實時熒光定量PCR儀(qPCR儀)。熒光定量PCR儀有單通道、雙通道和多通道。當只用一種熒光探針標記的時候,選用單通道,有多熒光標記的時候用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標記的目的基因表達產物,因為一次只能檢測一種目的基因的擴增量,需多次擴增才能檢測完不同目的基因片段的量。主要用于醫學臨床檢測、生物醫藥研發、食品行業、科研院校等機構。根據DNA擴增時升溫介質的不同可以將PCR儀分為:變溫鋁塊式PCR儀、水浴式PCR儀和變溫式流式PCR儀。1.變溫鋁塊式PCR儀熱源用電阻絲、導電熱膜、熱泵式珀爾帖半導體元件制作,讓帶有凹孔的鋁塊升溫,用自來水、制冷壓縮機或半導體降溫。優點:溫度傳導快,各管的擴增一致性好;反應管規格一致時無須外涂石蠟油;可用微電腦調節溫度轉換。 PCR可用于檢測特定細胞或生物體中等位基因的序列差異。
選擇該物種使用頻率高的密碼子,以降低引物的簡并性。③應努力避免3’末端的簡并,對于大多數氨基酸殘基來說,意味著引物3’末端不要位于密碼子的第三位。④在一些多義位置使用脫氧次黃嘌呤(dI)代替簡并堿基。4.測序引物設計當然,測序引物的設計一般都由測序公司來完成,如果需要自己設計的話;那么除了按照上面所提到的引物設計通用標準外,還需要注意兩點:①測序引物的特異性的標準掌握應該更嚴格一些,也就是說設計時更優先考慮特異性。因為在測序反應中,如果引物與模板在非預期位置退火并引發鏈延伸,會對結果對來很大的干擾甚至造成結果無法識讀。②測序引物的Tm值適當高一些。現在大部分測序反應均選用耐熱的測序級DNA聚合酶來催化,并采用PCR的熱循環程序。選用的測序引物的Tm值稍高一些,有助于使反應順利跨過待測模板的二級結構區,也有助于降低非特異反應。5.探針的設計探針的設計,根據不同的用途各有其設計特點,這里只是就通用的原則進行討論:①探針的長短一般在20-50核苷酸之間,過長合成成本高,且易出現聚合酶合成錯誤,雜交時間長。太短則特異性下降。②注意G和C的含量努力控制在40-60%,同時一種堿基連續重復不超過4個,以免非特異性雜交產生。 PCR實驗室在儀器設備等硬件上要滿足開展臨床檢驗的條件,包括生物安全柜和PCR儀。力康實時定量PCR儀價格便宜
熒光定量PCR是近年發展起來的實時定量檢測特定核酸技術,是核酸探針,熒光共振能量傳遞和PCR技術的有機結合.上海國產PCR儀近期價格
隨著科學技術發展,醫藥冷鏈物流技術不斷涌現,同時在我國高度重視下,冷鏈物流標準逐漸完善。但我國醫藥健康仍存在體系不完善、物流成本高和技術、設施落后的問題。在市場機遇與現存問題面前,如何把握醫藥健康未來發展趨勢顯得尤為重要。在《2019年本》鼓勵類條目中增加了“數字化手術室,實驗室儀器,新生兒科設備,ICU重癥產品的開發和生產”。在中藥產業領域,增加了“中藥飲片炮制技術傳承與創新,中藥經典名方的開發與生產,中藥創新的研發與生產”等內容。自2015年以來,健康科技成為醫藥健康外商獨資企業增長**快的領域。事實上,根據硅谷銀行的分析,有風投支持的健康科技行業募資次數在這段時間增長了25%,硅谷銀行與其中大約40%的歐美公司進行了合作。三類:6815注射穿刺器械,6821醫用電子儀器設備(不含植入類重點監管),6822醫用光學器具、儀器及內窺鏡設備(不含植入類重點監管),6823醫用超聲儀器及有關設備,6824醫用激光儀器設備,6825醫用高頻儀器設備,6826物理***及康復設備,6828醫用磁共振設備,6830醫用x射線設備,6832醫用高能射線設備,6833醫用核素設備,6845體外循環及血液處理 設備,6854手術室、急救室、診療室設備及器具,6858醫用冷療、低溫、冷藏設備及器具,6864醫用衛生材料及敷料,6866醫用高分子材料及制品(不含重點監管),6870軟件,6877介入器材(不含重點監管)***是我國國民經濟重要組成部分之一,具有高產出、高危險、高技術密集型特點,有很強的技術壁壘。而且對于保護和增進大家健康、提高生活質量,為計劃生育、救災防疫、**戰備以及促進經濟發展和社會進步均具有十分重要的作用。上海國產PCR儀近期價格
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