細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細胞暫時脫離生長狀態而將其細胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞,可以防止因正在培養的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種,起到了細胞保種的作用。為什么要進行細胞凍存?連續培養的細胞系容易發生遺傳漂變,有限細胞系較終會發生衰老,所有培養的細胞都易受到微生物污染,即使運轉情況較好的實驗室也會遇到設備故障的問題。由于已建立的細胞系是一種寶貴資源,更換細胞系成本高昂,而且耗費時間,因此,十分有必要將細胞冷凍起來長期保存。除此之外,還可以利用細胞凍存的形式來購買、寄贈、交換和運送某些細胞無血清細胞凍存液用于其他類型哺乳動物細胞的儲存。南昌正規無血清細胞凍存液平均價格
無血清細胞凍存液:解凍解凍后,應該立即鋪板在預先包被好的培養皿中。上述凍存的一管細胞可以成功的鋪板到6孔板的1-2孔。1.開始之前,提前準備好以下材料:試管,恢復至室溫的培養基,預先包被的培養板,確保整個解凍復蘇程序可以在較短的時間內完成。注意:不要在37°C水浴中加熱培養基。2.在37°C水浴中快速解凍,持續溫和的在水中晃動凍存管,直到剩余少量細胞還處于凍存狀態。3.水浴中取出凍存管,用70%的酒精或異丙醇擦拭除菌。4.用2mL的血清移液管把細胞懸液轉移到一個15mL的錐形試管。注意:用2mL的血清移液管代替1mL的頭可以減少細胞聚集體的分解。南昌正規無血清細胞凍存液平均價格無血清凍存液注意事項:若需長期凍存細胞,請轉移至液氮罐中貯存。
這是一款無血清即用型細胞保存液,比較大的特點就是無需程序降溫盒及稀釋,無需分步降溫,直接使用!可在-80℃長期保存ES/iPS細胞、腫瘤細胞和常規細胞。冷凍細胞時,用1ml該細胞凍存液懸浮處于對數生長期的細胞,不需預冷,直接-80℃冷凍保存,也可用液氮快速冷凍細胞;復蘇時用恒溫箱或者水浴鍋快速復蘇細胞即可。不僅操作方便,更能提供穩定的凍存效果,獲得更好的細胞活力。一款不需要放液氮罐也能長期保存的細胞凍存液試用裝申請正在進行。。。
細胞凍存及復蘇的基本原則是“慢凍快融”,這樣可以較大限度的保存細胞活力。目前細胞凍存多用二甲基亞砜(DMSO)作為保護劑,這兩種物質能提高細胞膜對水的通透性;緩慢冷凍可使細胞內的水分滲出細胞外,減少細胞內冰晶的形成,從而減少冰晶對細胞的物理損傷。復蘇細胞采用快速融化的方法可以保證細胞外結晶在很短的時間內融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細胞內形成胞內再結晶對細胞造成損傷。血清完全細胞凍存液,通用于各種動物細胞株。特別配方有效提高細胞存活率和活力。不含動物來源性蛋白,能減少各類病毒、霉菌和支原體等污染,確保凍存細胞安全。適合用于無血清培養細胞和蛋白表達細胞。無血清細胞凍存液:凍存細胞,無需程序降溫。
無血清細胞凍存液與含血清細胞凍存液對比:傳統的細胞凍存液是使用培養基、血清和DMSO按照一定的比例混合,其中DMSO的含量是10%,血清的含量是10%,統稱為含血清細胞凍存液。含血清細胞凍存液的一般的凍存方法是梯度降溫凍存法,如先將冷凍管置于4℃冰箱10分鐘,然后移至-20℃冰箱30分鐘,再移至-80℃冰箱保存16-18個小時(或隔夜),較后才移至液氮罐中進行長期的儲存??梢?,含血清細胞凍存液凍存細胞時遇到的問題:1.凍存細胞時需現配凍存液(如購買市面上通用的含血清細胞凍存液,此步可省略)。2.需要程序降溫(4℃→-20℃→-80℃→液氮),步驟繁瑣,耗時耗力。3.含血清,細胞污染(病毒、霉菌和支原體等)的風險更高。4.血清批次、品質間差異導致凍存液的批次間差異。5.需液氮凍存,且不能原位(如孔板)凍存。加入適量細胞凍存液于離心管中,使細胞濃度為1x106~1x107 cells/mL。南昌正規無血清細胞凍存液平均價格
無血清細胞凍存液,2-8℃保存即可,無需再進行分裝。南昌正規無血清細胞凍存液平均價格
干細胞無血清凍存液操作事項:使用說明:1.細胞消化和計數,用胰酶對待凍存的細胞進行消化,并對細胞進行計數。2.1000轉/min離心5分鐘(4℃),去掉上清。3.根據細胞計數的情況,加入適量的干細胞無血清凍存液,使細胞密度在1×106左右(或根據自己希望達到的細胞密度)。4.輕輕地重懸細胞(務必重懸均勻)。5.將重懸的細胞按等份加入到滅菌的凍存管(需提前做好標記或者貼上標簽)中,旋緊凍存管蓋。6.將凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒直接放入-80℃。7.第二天將細胞從-80℃轉移到液氮中。注意事項:1.用處于對數生長期的細胞進行凍存。2.控制好胰酶的消化時間,切記消化過度,會影響復蘇效果。3.重懸細胞的過程中,請務必要輕柔,以免損傷細胞,但同時也一定要充分重懸,這樣細胞在復蘇時才不會成團。4.細胞操作請注意無菌。南昌正規無血清細胞凍存液平均價格