穩定轉染細胞系的篩選：生長的細胞比不分裂的細胞更快的受到GENETICIN物品的影響。轉染后，在開始篩選前等待48-72小時，使細胞表達足夠量的抗性酶，保證在開始篩選時可以自我保護。轉染后48-72小時倒掉培養基，加入含有GENETICIN物品的培養基，物品的濃度根據劑量反應曲線確定，足夠殺死未轉染細胞。因為許多因子影響到篩選所需的GENETICIN物品的較佳濃度，包括細胞類型，培養基和血清濃度等，所以有必要對每種細胞作一個劑量反應曲線，確定較佳濃度。篩選較多可能需要一周時間，因為在致死劑量的GENETICIN物品存在條件下，細胞會分裂1-2次。在次培養細胞時使用較低劑量的物品，一般是篩選劑量的一半。篩選后的細胞一般是離散的克隆，根據實驗目的不同，可以分別純化（克隆），收集進行大量培養或染色并進行抗性克隆的計數。轉染試劑的準備①將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。南昌細胞高效轉染試劑廠家供應

轉染的注意事項：細胞鋪板密度用于轉染的較佳細胞密度根據不同的細胞類型或應用而異。一般轉染時，貼壁細胞密度為70%-90%，懸浮細胞密度為2×106-4×106細胞/ml時效果較好。確保轉染時細胞沒有長滿或處于靜止期。因為轉染效率對細胞密度很敏感，所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要。鋪板細胞數目的增加可以增加轉染活性和細胞產量。在三種不同密度進行細胞鋪板的比較表明鋪板密度較高的，CAT活性也較高。得到較高活性所需的LIPOFECTAMINE試劑的量也相應增加了。這些結果說明，對于轉染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質體試劑的量會因細胞密度而異~濟南正規細胞高效轉染試劑廠家批發價蛋白表達和培養基的選擇哺乳動物細胞系合成可溶的。

細胞轉染的常用方法：人工脂質體法原理：帶正電的脂質體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物，進而可被細胞內吞穩定轉染/瞬時性轉染。這種方法幾乎適用于所有細胞，轉染效率高、重復型好，但轉染時需要去除血清，轉染效果隨細胞類型變化大。實驗步驟：在單獨試管中分別稀釋核酸及轉染試劑→脂質體與核酸的磷酸骨架結合，形成復合物→脂質體上的正電荷有助于復合物與細胞膜結合→復合物通過內吞作用進入胞漿→分析細胞瞬時基因表達或沉默情況。

如何高效率實現細胞轉染：DNA轉染導入細胞胞漿內的DNA不能穿過細胞核的核膜（"核屏障"）。在細胞有絲分裂過程中核膜溶解，DNA進入細胞核才有可能。為此，細胞處于分裂期對DNA轉染是至關重要的，并且處于分裂期的細胞比例必須盡可能大才能實現高效轉染。DNA轉染機制示意圖如下所示：轉染RNA(siRNA/miRNA/mRNA)對于RNA轉染是沒有"核屏障"的，因為RNA不需要進入細胞核發揮其生物學效應，因此細胞分裂對它沒有影響。轉染試劑的選擇理想的轉染試劑選擇可以使您的實驗如虎添翼！真核細胞的先天免疫系統，使它們能夠檢測外來物質如脂多糖、細菌或細菌核酸和蛋白質，并克制潛在病原體的入侵。此外，細胞通過信使分子向臨近細胞傳遞發現有害物質的信號。因此，這些臨近細胞甚至無需接觸病原體即可采取防御方式。這種細胞先天免疫系統也是轉染成功的一個障礙。瞬時和穩定表達DNA轉染后，轉入基因的表達可以在1－4天內檢測到。

細胞轉染實驗注意事項：1.培養基中的物品物品是影響轉染的培養基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性，使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率降低。這時候可以選擇Entranster轉染試劑，非脂質體試劑，培養基可加物品，避免了細胞染菌。2.設置陽性對照和陰性對照。3.一般在轉染24-48h，靶基因即在細胞內表達。根據不同的實驗目的，24-48h后即可進行靶基因表達的檢測實驗。4.如若建立穩定的細胞系，則可對靶細胞進行篩選，根據不同基因載體中所含有的抗性標志選用相應的藥物，常用的真核表達基因載體的標志物有潮霉素和新霉素等。通過實驗優化合適的轉染條件對于轉染效率的提高很重要。南京北京細胞高效轉染試劑

一類是瞬時轉染，一類是穩定轉染（很長轉染）。南昌細胞高效轉染試劑廠家供應

細胞轉染的注意事項：物品(PS)物品，比如青霉素和鏈霉素，是影響轉染的培養基添加物。這些物品一般對于真核細胞無毒，但陽離子脂質體試劑增加了細胞的通透性，使物品可以進入細胞。這降低了細胞的活性，導致轉染效率低。所以，在轉染培養基中不能使用物品，甚至在準備轉染前進行細胞鋪板時也要避免使用物品。這樣，在轉染前也不必潤洗細胞。對于穩定轉染，不要在選擇性培養基中使用青霉素和鏈霉素，ICIN選擇性物品的競爭性克制劑。另外，為了保證無血清培養基中細胞的健康生長，使用比含血清培養基更少的物品量。南昌細胞高效轉染試劑廠家供應