細胞轉染實驗的方法有哪些：1..電穿孔法。通過短暫的高電場電脈沖處理細胞，沿細胞膜的電壓差異會導致細胞膜的暫時穿孔。DNA被認為是穿過孔擴散到細胞內的。電脈沖和場強的優化對于成功的轉染非常重要，因為過高的場強和過長的電脈沖時間會不可逆地傷害細胞膜而裂解細胞。理論上說電穿孔法可用于各種細胞，且不需要另外采購特殊試劑，但需要昂貴的電轉儀。此法每次轉染需要更多的細胞和DNA，因為細胞的死亡率高。每種細胞電轉的條件都需要進行多次優化。2.細菌介導的傳染。傳染需要將目的基因克隆到特定的細菌體系中，經過包裝細胞的包裝得到改造后的細菌，再進行傳染。重新接種于培養皿或瓶，較好在轉染前4小時換一次新鮮培養液。徐州廣州細胞高效轉染試劑

細胞轉染那些事兒：1.設置陰性和陽性對照：一般在轉染后24-48h,靶基因即在細胞內表達。可依據不同的實驗目的，24-48h后即可進行靶基因表達的檢測等實驗。2.轉染后效率的檢測方法：觀察轉染后細胞熒光情況；qPCR驗證；WB檢測敲減或過表達蛋白。3.轉染效率低，可采取以下兩種方法：1)復轉染，即轉染后12-24h再進行轉染，前提是該細胞對脂質體的耐受性較好，轉染后細胞死亡數較少。2)通過藥篩來殺死未轉入成功的細胞，前提是該質粒帶有物品抗性的基因。4.電轉時，不同的細胞需要的電壓是不一樣的，需要做預實驗，摸索較佳條件。對于大多數細胞而言，較佳電壓位于250-1250v/cm。電擊后，應該將DNA和細胞混合液在室溫下放置10min,使細胞恢復損傷。石家莊正規細胞高效轉染試劑哪家好有血清時的轉染 血清一度曾被認為會降低轉染效率。

轉染的注意事項：細胞鋪板密度用于轉染的較佳細胞密度根據不同的細胞類型或應用而異。一般轉染時，貼壁細胞密度為70%-90%，懸浮細胞密度為2×106-4×106細胞/ml時效果較好。確保轉染時細胞沒有長滿或處于靜止期。因為轉染效率對細胞密度很敏感，所以在不同實驗間保持一個基本的傳代步驟很重要。鋪板細胞數目的增加可以增加轉染活性和細胞產量。在三種不同密度進行細胞鋪板的比較表明鋪板密度較高的，CAT活性也較高。得到較高活性所需的LIPOFECTAMINE試劑的量也相應增加了。這些結果說明，對于轉染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質體試劑的量會因細胞密度而異。

細胞轉染效率低下的幾個大坑：1.試劑過期有時候轉染效率低下，還要考慮會不會存在試劑過期的情況。毛博當年做轉染整整半年，百思不得其解。較后發現，原來是Lipofectamine2000過期了。換了之后，立馬成功。根據我的經驗，盡量使用開封半年內的，因為過了半年后，就算沒有過失效期，但是細胞毒性較大增加，而轉染效率卻較大下降。千萬不要為了省錢，影響實驗進度哈。2.未加血清轉染后未及時加入血清，會導致細胞大量死亡。一般要在轉染后的4-6小時換液且換為有血清的培養基。根據毛博的經驗，其實也可以在原來的無血清培養基里面滴加血清。這個時候，較好不要換液，不要打擾細胞，讓它安安靜靜地休息。但是也不能過早加入血清。過早的話，會引起未轉染的細胞瘋狂生長。那么，什么是較佳時機呢？在20%的細胞變圓的時候，就是加血清的較佳時機。再通過融合或細胞內吞進入細胞。

細胞轉染的常用方法：細菌轉染：原理：對于用脂質體不能實現轉染的細胞，可以采用細菌轉染。可用于蛋白質過表達或克制，是臨床研究中較常用的方法。它通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中，可用于難轉染細胞、原代細胞的穩定性轉染。實驗步驟：通過基因克隆生成重組細菌→采用非細菌法轉染包裝細胞系，擴增并分離得到重組細菌顆粒→純化并滴定細菌液→轉導目的細胞（含有細菌特異性的受體）→去除培養物中的細菌，并加入新鮮培養基→分析細胞瞬時基因表達或沉默情況。大部分外源DNA會被核酸酶降解或隨細胞分裂而稀釋。徐州廣州細胞高效轉染試劑

總染色體重組或基因調控變化等而演化。徐州廣州細胞高效轉染試劑

細胞轉染常用步驟：1.轉染試劑的準備①將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。②震蕩后將試劑放在－20攝氏度保存，使用前還需震蕩。2.選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質體體積：DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉染試劑，再次震蕩。3.將混合液在室溫放置10―15分鐘。4.吸去培養板中的培養基，用PBS或者無血清培養基清洗一次。5.加入混合液，將細胞放回培養箱中培養一個小時。6.到時后，根據細胞種類決定是否移除混合液，之后加入完全培養基繼續培養24－48小時~徐州廣州細胞高效轉染試劑