細胞轉染操作方法：轉染，是將外源性基因導入細胞內的一種專門技術。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉染目前已成為實驗室工作中經常涉及的基本方法。轉染大致可分為物理介導、化學介導和生物介導三類途徑。電穿孔法、顯微注射和基因屬于通過物理方法將基因導入細胞的范例；化學介導方法很多，如經典的磷酸鈣共沉淀法、脂質體轉染方法、和多種陽離子物質介導的技術；生物介導方法，有較為原始的原生質體轉染，和現在比較多見的各種細菌介導的轉染技術。理想細胞轉染方法，應該具有轉染效率高、細胞毒性小等優點。細菌介導的轉染技術，是目前轉染效率較高的方法，同時具有細胞毒性很低的優勢。但是，細菌轉染方法的準備程序復雜，常常對細胞類型有很強的選擇性，在一般實驗室中很難普及。細胞密度以及轉染的時間長短和培養基中血清的含量都是影響轉染效率的重要因素。寧波南昌細胞高效轉染試劑

細胞轉染為什么不能加血清：不同的細胞及轉染試劑要求轉染的條件是不同的。較好是在靠前次實驗前做一個預實驗，比如：HeLa，293，CHO，COS7，MCF－7，HepG2等細胞，是否加血清，對不同的細胞是有不同的影響的，有些細胞是可以有血清的，有些加血清就會受影響。轉染后在6小時左右較好換液且換為有血清的培養基，其一因為普通轉染試劑對細胞的毒性作用大，其二可降低因血清的缺乏引起的細胞的死亡。轉染時不加血清是防止血清的干擾作用，轉染后可適時加入。加入過早會引起未轉染細胞的優勢生長，過晚會引起較多細胞死亡。可實時觀察1/5細胞變圓的時候加入血清。寧波南昌細胞高效轉染試劑對于貼壁細胞，一般要求在轉染前一日，用胰酶處理為單細胞懸液。

細胞轉染之PEI轉染法：1.細胞分盤：通過胰酶消化收集細胞，用適當的完全培養基以1×105至4×105細胞/cm2的密度平鋪細胞于35mm培養皿上（根據實驗需要選擇培養皿，使細胞貼壁后所占面積達到培養皿總面積的70－90％）。將細胞置于含5％CO2的37℃溫箱中孵育8-24h，當細胞貼壁完全后即可開始轉染。轉染前2h換液（用1.5ml無血清培養基置換舊的培養基）。注：PEI轉染法對細胞生長有克制作用，在換液前細胞幾乎不生長，所以需要密度比較大時做轉染。2.制備PEI-DNA混合物以35mm組織培養皿用240μl反應總體積為例。先在無菌EP管中加入120μl1×HBS,再加入質粒DNA（總量1-3μg為佳），混勻后加入等體積PEI工作液，充分混勻后室溫靜置20-30min，較后將這240μl的PEI-DNA混合液逐滴加入上述單層細胞的細胞培養基中，輕輕搖動平皿混勻后置于含5％CO2的37℃溫箱孵育。

細胞轉染實驗的方法有哪些：1.電穿孔法。通過短暫的高電場電脈沖處理細胞，沿細胞膜的電壓差異會導致細胞膜的暫時穿孔。DNA被認為是穿過孔擴散到細胞內的。電脈沖和場強的優化對于成功的轉染非常重要，因為過高的場強和過長的電脈沖時間會不可逆地傷害細胞膜而裂解細胞。理論上說電穿孔法可用于各種細胞，且不需要另外采購特殊試劑，但需要昂貴的電轉儀。此法每次轉染需要更多的細胞和DNA，因為細胞的死亡率高。每種細胞電轉的條件都需要進行多次優化。2.細菌介導的傳染。傳染需要將目的基因克隆到特定的細菌體系中，經過包裝細胞的包裝得到改造后的細菌，再進行傳染。優點是轉染效率特別高，尤其是難以轉染的原代細胞、細胞。缺點是構建細菌周期長，環節多，易出錯，費用也高瞬時轉染的細胞中，外源基因得以表達但它們并不會整合到細胞的基因組中。

細胞轉染：(1)轉染試劑的準備A.將400ul去核酸酶水加入管中，震蕩10秒鐘，溶解脂狀物。B.震蕩后將試劑放在-20攝氏度保存，使用前還需震蕩，。(2)選擇合適的混合比例(1：1-1：2/脂質體體積：DNA質量)來轉染細胞。在一個轉染管中加入合適體積的無血清培養基。加入合適質量的MyoD或者EGFP的DNA，震蕩后在加入合適體積的轉染試劑，再次震蕩。(3)將混合液在室溫放置10—15分鐘。(4)吸去培養板中的培養基，用PBS或者無血清培養基清洗一次。(5)加入混合液，將細胞放回培養箱中培養一個小時。(6)到時后，根據細胞種類決定是否移除混合液，之后加入完全培養基繼續培養24-48小時。使用基質珠做為固相支持可以使貼壁細胞懸浮生長。上海細胞高效轉染試劑廠家現貨

對于轉染相同量的DNA所需的較佳陽離子脂質體試劑的量會因細胞密度而異。寧波南昌細胞高效轉染試劑

轉染的注意事項：用于蛋白生產的細胞的轉染可以在添加有血清或無血清培養基中進行。但更傾向于使用無血清培養基表達蛋白，因為血清蛋白會干擾下游表達蛋白的純化。無血清培養基一般針對某一特定細胞類型優化并有幾類無血清培養基不需要添加血清，一般含有不均一的或大量的蛋白（但比添加血清的培養基低得多）。無蛋白培養基不含蛋白但可能含有不明成分的抽提物，限定化學成分的培養基不含有蛋白或未知組成的成分。多種多樣的配方使您可以選擇較適合您應用的一種。在含血清時轉染的細胞可以適應無血清培養基，無蛋白培養基或限定化學成分的培養基。在部分情況下（如293-F，293-H，COS-7和CHO-S），對于已適應無血清或無蛋白培養基的細胞，可以使用其培養基進行轉染。其他一些無血清培養基包含克制陰離子脂質體介導轉染的成分，在這些情況下，有必要在諸如D-MEM或OPTI-MEMⅠ等培養基中進行培養和轉染寧波南昌細胞高效轉染試劑