一種基于鼠尾膠原蛋白制備的可吸收止血的優點:1、本發明制作的止血材料采用溫和的冷凍干燥操作工藝不光光提高了生產效率,同時避開了使用其他設備帶來的成本上升問題。2、本發明專利生產的止血材料(止血海綿),其動物實驗表明其具有非常好的止血效果。也可應用于內臟出血。具有廣闊的應用前景。3、本發明制備的止血材料具有可完全被人體吸收,與出血創面一接觸,其接觸面迅速形成凝膠而粘附在出血創面上,外面則形成連續的壓迫干層。啟動凝血因子。同時,聚乙烯醇為成膜材料,兩種的協同效應形成了一種理想的止血狀態和結構。鼠尾膠原蛋白 型在濃度1mg/ml 以上, pH 左右時可形成具有一定強度三維膠。昆明鼠尾膠原廠家現貨
鼠尾膠原:1實驗制備:實驗設備及材料:大鼠尾巴、剪刀、鑷子、止血鉗、彎頭吸管、平皿、三角燒瓶、燒杯、量筒、天平、生理鹽水、75%酒精、0.1%醋酸溶液、蓋玻片、培養瓶、鉆石筆、鼠尾膠原。實驗內容:1、制備鼠尾膠原(兩個同學一組操作)。2、切割小玻片。3、利用鼠尾膠原將小玻片固定于培養瓶內。實驗步驟:制備鼠尾膠原:1、取大鼠尾巴洗凈,75%酒精浸泡5分鐘;2、手持尾巴,用止血鉗夾住鼠尾的較高,折斷尾骨后拉出尾腱;3、將尾腱剪斷置于平皿中,生理鹽水浸泡;4、重復步驟2、3,直至尾腱量夠用;5、吸去生理鹽水,將尾腱稱重(0.5-1克)。天津正規鼠尾膠原生產廠家將培養器皿在室溫放置20min待膠凝固后,加入適當體積的細胞培養液,轉移到培養箱中培養。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:三維膠原的制備鼠尾膠原蛋白型在濃度1mg/ml以上,pH左右時可形成具有一定強度三維膠,建議成膠濃度1-2mg/ml。膠原蛋白溶解于0.006mol/L乙酸中,在成膠過程中需要加入0.06體積的0.1mol/LNaOH來中和。需要的溶液(均需要無菌、預冷)10mg/L酚紅用于pH指示)0.1mol/LNaOH,0.1mol/L乙酸(一般不用),雙蒸水200ul鼠尾膠原蛋白型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中,加入690ulH2O12ul0.1mol/LNaOH12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結)立即混勻。再加入100ul10PBS10培養液,混勻后立即加到培養器皿中(混勻后pH左右,如果PBS或培養液中沒有加酚紅,初次使用時需要用pH試紙測試)。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。
鼠尾膠原醋酸溶解:1.將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中,制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2.建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經發現該方法會導致丟失蛋白。3.稀釋一定數量的膠原溶液。4.按照6-10ug/cm2的濃度包被培養瓶。在室溫或37度結合數小時或者2-8度過夜。5.從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的,這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。在接種細胞前用無菌的水漂洗。膠原蛋白就像骨骼中的一張充滿小洞的網,它會牢牢地留住就要流失的鈣質。
鼠尾膠原,10mg包裝,配制方法如下:1.配0.1M的乙酸溶液100ml。即取575ul冰乙酸加超純水至100ml,容量瓶配制比較準確。2.用吸管吸取10ml剛配好的0.1M乙酸溶液(不要用*加,吸十次不如加一次z準確),加入盛膠原的瓶中,輕輕顛倒,不要震蕩,蛋白容易起泡。幾分鐘即可,蛋白質非常好溶解。3.將膠原溶液移入事先壓好的玻璃瓶中,比青霉素瓶大點的就行。用*在瓶底加1ml氯仿,打到一檔就行,避免加入氣泡。然后4度過夜除菌。4.第二天將上層膠原溶液分裝進EP管中。用封口膜封口,4度保存,勿冷凍。開蓋在超凈臺上過夜晾干,也可以在室溫放置1小時后。合肥天津鼠尾膠原
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膠原的立體結構與一般的球狀蛋白質完全不同,每一條亞基形成一股左手旋轉的螺旋,其中每3個氨基酸殘基形成一圈螺旋。3條左手螺旋再扭在一起形成一個右手大螺旋。這樣的螺旋稱為3股螺旋。小的甘氨酸殘基位于3股螺旋內部。3股螺旋式的棒狀膠原分子的大小約是3000×15埃,這些棒狀分子首尾相連,并側向排列形成膠原微絲(其直徑可從50埃至數千埃)。膠原分子在兩端及沿軸向每隔680埃的距離存在極性區,這些極性區能和重金屬離子結合,使膠原纖維在電子顯微鏡下形成間距為680埃的明暗相間的特征性的橫紋結構。昆明鼠尾膠原廠家現貨