原代細胞傳代培養方法：1.當細胞達到80-90%融合時需要傳代培養。2.提前準備好多聚賴氨酸（PLL，貨號0403）或纖維粘連蛋白（BPF，貨號8248）包被好的培養瓶。3.將完全培養基，胰酶/EDTA消化液（T/E，貨號0103），胰胰中和液（TNS，貨號0113）和不含鈣鎂離子的DPBS（貨號0303）加熱至室溫。我們不推薦用37度水浴加熱試劑和培養基。4.用DPBS沖洗細胞。5.以T-75培養瓶為例，向培養瓶中加入8mlDPBS，然后加入2ml胰酶/EDTA消化液。輕輕搖動培養瓶保證細胞被胰酶/EDTA消化液完全覆蓋。將培養瓶置于37度培養箱1-2分鐘直到細胞變圓。在顯微鏡下觀察細胞形態變化。6.在消化期間，準備一支50ml離心管加入5ml胎牛血清（FBS，貨號0500）。在這些細胞之間能產生一些促生長的活性物質，使細胞彼此互相促進存活和生長。溫州原代細胞分離試劑盒廠家供應

原代細胞培養注意事項：原代內皮細胞提取：1)整個操作要在潔凈通風的超凈臺下進行，所有的器材要高壓消毒。2)根據BALB/c小鼠的體重，用10ml/kg3%濃度的戊巴比妥鈉麻醉；將小鼠置于盛有75%乙醇的燒杯內，這一步不僅可以消毒，也可以讓小鼠體毛浸濕，后續剃去皮毛的時候不會沾到剪刀或組織上。3)用鑷子輕輕挑起小鼠的心臟，裝有PBS的注射器插入心尖，同時在右心耳處剪開一個小口，緩慢推動注射器，隨著心臟的跳動，將體內的血液沖洗出來。4)取出小鼠的肺部組織，將肺組織切成小米粒樣的大小，置于預冷的HBSS中反復沖洗幾次。5)將小米粒大小的肺組織置于培養瓶中（培養瓶前現在用1%明膠溶液包被培養面，4度過夜，小鼠處理前，將培養瓶放置培養箱中，使其溫度恢復至37度），置于培養箱37度的環境下，消化4個小時。廣州正規原代細胞分離試劑盒產品介紹給培養的細胞提供更多的類似于在體內時細胞之間的相互作用。

細胞培養注意事項及常見問題解答：1、培養基的選擇依細胞種類而定。如果是從別的實驗室借來的細胞，較初階段一定要保持細胞原有的培養條件；特殊種類的細胞，比如內皮細胞，可以借鑒網上培養成功的條件，添加一些特定成分。2、液體培養基的保存條件應是冰箱4度冷藏。小六兒見過有的大實驗室細胞量多，一次性購買的培養基瓶數也多，有些人可能覺得-20冰箱保存時間會更久一些。但是經過冷凍后的培養基再溶化時，你會發現培養基的顏色發生變化，顏色變深，這就是培養基的PH值升高了。3、培養基中都含有大量的谷氨酰胺，用來合成細胞生長所需要的核酸和蛋白質。但是谷氨酰胺在溶液中不穩定，保存4周后的培養基需要重新加入谷氨酰胺。所以盡量不要大批量購買培養，也不要一次配太多的培養基

原代細胞培養之取材：取材作為原代細胞培養過程中的靠前部至關重要，以下幾種取材技術，你都用過哪些方法呢？各類組織取材，操作及注意事項：1.皮膚和粘膜主要取皮片，面積一般2~4平方厘米。2.內臟和實體瘤：1）無菌環境；2）熟悉所需組織的類型和部位；3）要避開破潰、壞死液化部分，以防污染，盡量去除混雜的結締組織。3.血液細胞一般多抽取靜脈外周血，或從淋巴組織中(如脾、扁桃體、胸腺、淋巴結等)分離細胞，取材時應注意抗凝。4.骨髓、羊水、胸/腹水細胞嚴格無菌，注意抗凝，還要盡快分離培養，離心后，用無鈣、鎂PBS洗兩次，再用培養液洗一次后即可培養，不宜低溫存放。應該添加額外的組織特異性因子，以防止成纖維細胞的生長。

原代細胞的培養條件：靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養)培養：a.細胞要通過充分漂洗，以盡量除去消化液的毒性。b.細胞接種時濃度要稍大一些，至少為5×108細胞/L。c.培養基可用Eagle(MEMCorning10-010-CVR)或DMEM(Corning10-013-CVR)培養。d.胎牛血清濃度為10%-80%。e.應在37℃5%CO2的培養箱中培養。f.在起始的2天中盡量減少振蕩，以防止剛貼壁的細胞發生脫落，漂浮。g.待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網狀，應將原代細胞換液。h.用骨髓或外周血中的懸浮細胞經靜置培養1周時，應將細胞懸液經低速離心后換液。適當增大原代培養接種的細胞密度。北京原代細胞分離試劑盒直銷價

打開蓋子，注意手指不要碰到里面的螺紋。溫州原代細胞分離試劑盒廠家供應

原代細胞的小知識：1.解凍原代細胞對解凍過程非常敏感，因此將小瓶置于37℃水浴鍋中，保持并輕輕旋轉直到內容物剛剛解凍是很重要的。然后應立即從水浴中取出小瓶，并轉移到無菌操作臺。確保您的培養瓶在解凍前已經準備就緒，以便可以立即用于接種細胞，并置于培養箱中，我們在使用cellsystems的原代視網膜內皮細胞時，復蘇的時候沒有去離心，第二天換個液就可以。2.傳代原代細胞有間隙克制接觸不良反應，所以細胞不能到達100%的密度的時候傳代，一般較有效的建議觀察細胞的生長周期，CellSystems的原代細胞在細胞密度達到85%左右的時候傳代較佳，當生長至100％匯合時，它就會衰老。記住，所有的原代細胞不是100％純，因此我們要盡量減少污染細胞的生長。當細胞傳代時，使用低濃度的胰蛋白酶，也可以嘗試下cellsystems的整體消化套裝哦（品牌：cellsystems，貨號：4Z0-800）并在顯微鏡下密切監測細胞。此外，記得在胰蛋白酶消化后完全中和細胞中的胰酶，因為任何活性的胰蛋白酶都將損傷細胞溫州原代細胞分離試劑盒廠家供應