外泌體的形成與鑒定：首先，細胞膜內陷形成一個杯狀結構，包括細胞表面蛋白和與細胞外環境相關的可溶性蛋白，導致早期胞內體(early-sortingendosome，ESE)的從頭形成，或者是杯狀結構直接和已經存在的ESEs融合；trans-高爾基體和內質網也能協助形成ESEs。ESE成熟后形成晚期胞內體(late-sortingendosomes，LSEs)，較終形成MVBs(也稱為多囊內小體)。MVBs是通過endosome限制膜向內凹(即質膜雙凹)形成的，這一過程導致MVBs含有多個ILVs。MVB可以與溶酶體或自噬體融合，較終降解或與質膜融合釋放作為外泌體的ILVs。外泌體表面蛋白包括四聚體蛋白、整合蛋白、免疫調節蛋白等。外泌體可以包含不同類型的細胞表面蛋白、細胞內蛋白、RNA、DNA、氨基酸和代謝物。使用可截留100KD分子量的膜，通過離心截留上清中的外泌體，截留完成后。外泌體提取：使用抗體包被珠子的分離不適合從大量樣本中獲得外泌體。太原正規外泌體提取試劑生產廠家

外泌體的提取主要包括以下幾種方式：一是超速離心法，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時發現外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統一的鑒定標準，也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心，這種操作簡單、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準備工作繁雜，耗時，量少。四是免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進行下一步的實驗。五是PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細胞共培養和體內注射。2016.9《ScientificReports》雜志發表了該方法較新數據，表明PS法可提取相當高純度的外泌體。六是色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設備，應用不普遍。合肥外泌體提取試劑廠家推薦外泌體攜帶大量特異性的蛋白質以及功能性的mRNAs、miRNAs等生物活性物質。

外泌體的生物學功能研究中需要分離完整的外泌體顆粒，而傳統超速離心方法步驟繁瑣、硬件要求高、操作難度大。李記生物自主開發的外泌體快速提取試劑盒，組分經過優化處理，適用于細胞培養上清液、血清、血漿、尿液及其他體液（腦脊液、腹水、羊水、乳汁以及唾液等）中的外泌體提取，并搭配純化過濾裝置，可快速高效地獲得高純度外泌體顆粒。注意事項：1.對于待測樣品粘度過大時，可將樣本用4℃預冷的1×PBS緩沖液進行等體積稀釋處理。2.當血清、血漿、唾液等樣品收獲的外泌體濃度較高，收獲的外泌體顆粒無法通過EPF柱純化時，可用4℃預冷的1×PBS進行稀釋后再通過EPF柱離心。3.針對外泌體標志蛋白（CD63,CD9,CD81等）進行Westernblot檢測，可以鑒定所提的外泌體。通過超速離心(120000g/分鐘)20小時以上才能獲得足夠的外泌體量。

外泌體的提取、分離方法：尺寸排阻色譜法和超濾法；尺寸排阻色譜法是利用分子篩理論，較初是根據蛋白質分子大小分離蛋白質的色譜技術。該方法的主要優點是不需要很大的離心力，從而保證了外泌體的完整性。Mol等[13]對比超高速離心和尺寸排阻色譜法得到的外泌體蛋白，結果顯示，后者得到的外泌體的蛋白豐度高于前者。這些基于過濾或尺寸排阻色譜的新方法為外泌體大規模的生產和臨床應用提供了可能。超濾也是根據外泌體的尺寸將其分離出來的一種方法，超濾一般被認為是外泌體分離過程中的一個準備過程，通過超濾除去大分子和小分子的蛋白質。不過連續的超濾可以分離出外泌體，和超高速離心相比，超濾不需要特殊的設備就可以較短時間內分離出外泌體。但是，超濾膜對外泌體的黏附作用會降低外泌體的產量，并且超濾過程中施加的外力可能會使外泌體變形或者破裂。用于外泌體提取的體液收集注意事項：避免劇烈搖晃。

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是超速離心法，這是目前外泌體提取較常用的方法。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時發現外泌體聚集成塊，由于微泡和外泌體沒有非常統一的鑒定標準，也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。二是過濾離心，這種操作簡單、省時，不影響外泌體的生物活性，但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法，用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準備工作繁雜，耗時，量少。外泌體檢測作為一種新型的液體活檢熱點技術已被許多臨床科研機構普遍地應用于一些病癥和疾病的無創診斷。外泌體的提取、分離方法：尺寸排阻色譜法和超濾法。深圳正規外泌體提取試劑產品介紹

外泌體的提取分離：PEG-base沉淀法。太原正規外泌體提取試劑生產廠家

專利申請利用分離培養人尿液來源細胞并收集培養基來進行體外培養，直接把外泌體從尿液中沉降下來，無須分離培養人尿液來源細胞并收集培養基。人尿液來源細胞的外泌體的獲取方法，是首先分離培養人尿液來源細胞并收集培養基，將人尿液來源細胞的培養基通過0.22微米濾膜過濾，以去除大的細胞殘片以及其它雜質；然后離心除去細胞器，留取上清；再使用可截留100KD分子量的膜，通過離心截留上清中的外泌體，截留完成后，使用PBS對膜進行洗脫即得到外泌體濃縮液。太原正規外泌體提取試劑生產廠家