酸解提取鼠尾Ⅰ型膠原及相對分子質量和濃度檢測鼠尾肌腱在醋酸溶液的酸解作用下,其腱性組織被水解成膠凍狀溶液,從而分解成鼠尾Ⅰ型膠原蛋白分子。抽取鼠尾Ⅰ型膠原150 μL滴在薄膜上,可形成液滴狀膠原蛋白凝膠( ,其生物力學強度極差,一碰即散。將鼠尾膠原蛋白進行SDS-PAGE,結果顯示:Ⅰ型膠原蛋白原液在相對分子質量130 000附近有明顯條帶,另一條帶的相對分子質量大于170 000(圖 2) 。膠原蛋白濃度為1.8 mg/mL。吸取礦化液倒入小培養皿中,將鼠尾Ⅰ型膠原纖維浸泡在礦化液中。礦化2、6 d后,分別將礦化后的Ⅰ型膠原纖維進行TEM和電子衍射觀察。鼠尾型膠原構建與人類自體骨組織化學成分和分子結構相近的仿生骨材料。廣州鼠尾膠原報價
鼠尾膠原在心肌細胞氧化損傷中的保護作用:膠原蛋白具有抗氧化作用,但既往在實驗室主要將鼠尾膠原用于促進細胞貼壁和支架構建,對于其抗氧化作用目前尚無相關研究。目的:探討鼠尾膠原對過氧化氫導致離體心肌細胞氧化損傷的保護作用。方法:將原代培養的SD大鼠乳鼠心肌細胞隨機接種到鋪有鼠尾膠原的培養皿(實驗組)和普通培養皿(對照組)中,并且均用0,10,100μmol/L H2O2誘導。24 h后,以電子顯微鏡觀察各組乳鼠心肌細胞的形態,應用MTT 比色法檢測心肌細胞存活率,TUNEL 法檢測心肌細胞凋亡形態,流式細胞技術檢測心肌細胞凋亡率,黃嘌呤氧化酶法檢測超氧化物歧化酶活力,硫代巴比妥比色法檢測丙二醛水平,Western-Blot 檢測凋亡蛋白Bax、Bcl-2的表達。天津鼠尾膠原價格方法制作鼠尾膠原,觀察全細胞膜片鉗實驗中,自制的鼠尾膠原對前庭毛細胞的貼壁黏附作用。
使用方法:1、細胞培養器皿的表面包被:以包被濃度為2μg/cm2為例,用無菌0.006mol/L乙酸將膠原蛋白稀釋到0.012mg/mL。加到相應的培養器皿中,確保膠原蛋白溶液鋪滿器皿的表面。開蓋在超凈臺上過夜晾干,也可以在室溫放置1小時后,用PBS洗3~4次后直接使用。包被好的器皿在4~25℃至少可保存三個月以上的時間。2、三維膠原凝膠的制備:A、無細胞三維膠原凝膠的制備(以配制1mg/mL三維膠1mL為例)將200μL本品加到置于冰浴的離心管中,加入690μL雙蒸水,然后加到12μL0.1mol/LNaOH中(如果反過來把12μL0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中,會由于NaOH不能迅速混勻而產生局部的膠原凝結),立即混勻。再加入100μL10×PBS或10×培養液,混勻后立即加到培養器皿中(混勻后pH為7左右,如果PBS或培養液中沒有加酚紅,初次使用時需要測定pH值)。將培養器皿在室溫放置20min待膠凝固后,轉移到培養箱內。如果配制中使用的是10×PBS,使用前需要加入適當體積的細胞培養液預平衡。
鼠尾膠原蛋白I型,用那一種膠原酶可以溶解:1.將膠原加入到0.1M 的醋酸中,制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時直到完全溶解。2.建議將溶液轉移到擰口的玻璃瓶中,并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動或攪拌。在2-8度中放置過夜。在無菌條件下轉移上層的膠原溶液。我們不建議用過濾的方法無菌化。已經發現該方法會導致丟失蛋白。3.稀釋一定數量的膠原溶液。 4.按照6-10ug/cm2的濃度包被培養瓶。在室溫或37度結合數小時或者2-8度過夜。5.從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。如果膠原溶液不是無菌的,這時候可以在無菌細胞操作室中暴光在紫外線下過夜消毒。 在接種細胞前用無菌的水漂洗。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。從包被表面除去多余的液體。過夜干燥。
鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用方法及注意事項:通過醋酸抽提、氯化鈉沉淀、磷酸氫二鈉沉淀等 步驟制備的。鼠尾膠原蛋白可用于包被細胞培養器皿,培養一些在普通細胞 培養器皿中不易貼壁的細胞。也可用于制備三維膠,模擬真實的生長環境, 使細胞在三維環境中生長。 1,在使用鼠膠原蛋白 型包被的細胞培養皿中檢查到PC-12 細胞的 貼壁和生長。 1mg/ml濃度以上,pH 左右時可形成具有一定強度的三維膠,檢查到 NIH-3T3 細胞在三維膠內正常生長、PC-12 細胞在三維膠表面 正常生長。 使用方法: 1、細胞培養器皿的表面包被 推薦濃度: 1-5ug/cm 0.012mg/ml。按以下表格體積加到相應的培養器皿中。論鼠尾膠原能促進毛細胞貼壁,涂布鼠尾膠原有利于膜片鉗實驗的長時程記錄,并且制作簡便,成本低廉。當我們需要在培養瓶或培養皿內放置小玻片,制備細胞爬片時,可在瓶底涂一層膠原。無錫開封鼠尾膠原
鼠尾膠原蛋白用于生產明膠并添加到布丁和棉花糖中。廣州鼠尾膠原報價
鼠尾膠原簡介:鼠尾I型膠原蛋白(Collagenfromrattail,TypeI)系采用Birkedal-Hansen方法在無菌下制備,純度達到95%以上,可溶于0.006mol/L乙酸。本品可用于細胞培養皿的包被,特別適合普通細胞培養器皿不易貼壁細胞的培養;也可用于制備三維膠原凝膠,使細胞在模擬的三維環境中生長。質量標準:1、SDS-PAGE分析純度大于95%。2、無菌檢驗結果為陰性。3、本品2μg/cm2包被細胞培養皿后培養PC-12細胞,貼壁及生長正常。4、本品濃度1mg/mL,pH7.0時形成具有一定強度的三維膠原凝膠,NIH-3T3細胞在三維凝膠內生長正常、PC-12細胞在三維凝膠表面生長正常。廣州鼠尾膠原報價