動物細胞培養必需的溶液,平衡鹽水(BSS):Hanks 液和Earle液是常用的BSS基礎溶液。PH調整液:3.7%、5.6%、7.4%的NaHCO3溶液、HEPES溶液(二羥乙基哌嗪乙烷磺酸)細胞消化液:胰蛋白酶溶液、EDTA溶液、膠原酶溶液。1)青、鏈霉素,每毫升培養液含100U青霉素和100ug鏈霉素。2)卡那霉素:終濃度為50ug/ml培養液。3)制霉菌素:濃度25U/ml,小瓶分裝,每瓶一次用完。常用的動物血清主要有牛血清和馬血清。牛血清分為胎牛血清和犢牛血清,前者來源少,價格高;后者要求剛產下尚未哺乳的小牛,因為哺乳后的小牛血清中可能含有更復雜的成分。血清中已知的成分主要有蛋白質、氨基酸、葡萄糖等。蛋白質主要是白蛋白和球蛋白。在有些情況下,培養基還需要進行一些化學處理。BETA-SSA瓊脂基礎
培養基分類有哪些?營養缺陷型:野生型菌株經過人工誘變或者自然突變失去合成某種營養(氨基酸,維生素,核酸等)的能力,只有在基本培養基中補充所缺乏的營養因子才能生長,稱為營養缺陷型(auxotroph)。營養缺陷型是一種生化突變株,它的出現是由基因突變引起的。遺傳信息的載體是一系列為酶蛋白編碼的核酸系列,如果核酸系列中某堿基發生突變,由該基因所控制的酶合成受阻,該菌株也因此不能合成某種營養因子,使正常代謝失去平衡。改良MSRV培養基培養基可以分為有機培養基和無機培養基兩類。
培養基,是指供給微生物、植物或動物(或組織)生長繁殖的,由不同營養物質組合配制而成的營養基質。一般都含有碳水化合物、含氮物質、無機鹽(包括微量元素)、維生素和水等幾大類物質。培養基既是提供細胞營養和促使細胞增殖的基礎物質,也是細胞生長和繁殖的生存環境。培養基種類很多,根據配制原料的來源可分為自然培養基、合成培養基、半合成培養基;根據物理狀態可分為固體培養基、液體培養基、半固體培養基;根據培養功能可分為基礎培養基、選擇培養基、加富培養基、鑒別培養基等;根據使用范圍可分為細菌培養基、放線菌培養基、酵母菌培養基等。培養基配成后一般需測試并調節pH,還須進行滅菌,通常有高溫滅菌和過濾滅菌。培養基由于富含營養物質,易被污染或變質。配好后不宜久置,現配現用。
培養細胞時應使用5%還是10%CO2,或者根本沒有影響?一般培養基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作為pH的緩沖系統,而培養基中NaHCO3的含量將決定細胞培養時應使用的CO2濃度。當培養基中 NaHCO3含量為每公升3.7g時,細胞培養時應使用10% CO2;當培養基中NaHCO3 為每公升1.5g時,則應使用5%CO2培養細胞。NaHCO3的作用:培養基中使用了 NaHCO3-CO2 緩沖系統,并采用開放培養,使細胞代謝產生的CO2及時溢出培養瓶,再通過穩定調節溫箱中CO2濃度(5%) ,與培養基中的NaHCO3處于平衡狀態,從而調節培養基的PH值。NEAA:非必須氨基酸,NEAA(非必需氨基酸) 是含幾種非必需氨基酸的合劑,添加到的原培養基不同,NEAA 也有不同的種類,比如添加至MEM的NEAA,含L-Alanine、L-Asparagine、L-Aspartic Acid、 L-Glutamic Acid、L-Glycine、L-Proline、L-Serine。人工合成基因可以在特定的培養基中得到表達,需要選擇含有適當營養物質的培養基。
天然培養基是指來自動物體液或利用組織分離提取的一類培養基,如血漿、血清、、雞胚浸出液等。組織培養技術建立早期,體外培養細胞都是利用天然培養基。但是由于天然培養基制作過程復雜、批間差異大,因此逐漸為合成培養基所替代。普遍使用的天然培養基是血清,另外各種組織提取液、促進細胞貼壁的膠原類物質在培養某些特殊細胞也是必不可少。血清質量高低取決于兩方面因素:一是取材對象,二是取材過程。用于取材的動物應健康無病并且在指定的出生天數之內,取材過程應嚴格按照操作規程執行,制備出的血清要經過嚴格的質量鑒定。培養基是一種含有必需營養物質的生長介質,用于細胞、細菌的培養和繁殖。麥康凱瓊脂培養基(MacC) ChP
半固態培養基是一種介于液態培養基和固體培養基之間的混合形式,常用于篩選微生物菌株。BETA-SSA瓊脂基礎
鑒別培養基(differential media) 在培養基中加入某一反應底物和指示劑,以區別某些微生物的特性從而鑒別之。又分一般鑒別培養基和選擇性鑒別培養基。只用于區別不同微生物種類的培養基稱為-般鑒別培養基,此類培養基中一般不加抑菌劑而只含指示劑,如克氏雙糖鐵培養基,含有葡萄糖及乳糖,以酚紅作為指示劑,觀察培養基底層與斜面的顏色變化判定細菌對葡萄糖和乳糖的發酵能力,加人檸檬酸鐵銨,培養后觀察是否產生黑色沉著以判定細菌是否分解蛋白胨中的含硫氨基酸而產生硫化氫;又如伊紅-美藍瓊脂,含有乳糖(反應底物)、伊紅-美藍(指示劑)用以鑒別大腸埃希菌、腸道病原菌和其他雜菌。一般鑒別培養基的特點是在配方中都含有指示劑,并可用于區別不同種類的微生物,有些鑒別培養基也可同時作為細菌的特殊需要用來分離培養某些細菌,如胰酪胨大豆瓊脂和巧克力色血瓊脂。BETA-SSA瓊脂基礎
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