naica®六通道微滴芯片數字PCR系統,源于crystal微滴芯片數字PCR技術,自動化微滴生成和擴增,每個樣本孔可實現6熒光通道的檢測,智能化識別微滴并進行質控,3小時內即可獲得至少6個靶標基因的一定程度上拷貝數濃度,融合傳統微滴式和芯片式優勢,被稱為下一代數字PCR技術。只需一步移液操作,將PCR反應液加載于創新型微流控芯片,naica®六通道微滴芯片數字PCR系統即可自動生成單層平鋪的2D微滴陣列,隨后對每個微滴進行溫度均勻一致的PCR擴增后,進行六通道熒光信號采集,計數陰陽性微滴,通過泊松分布計算獲得靶標基因一定程度上拷貝數濃度。三重ddPCR檢測體系存在的問題:不同位點檢測體系之間的cross-reactivity。雙螺旋生物儀器數字PCR原理
數字PCR的引物和探針設計規則同熒光定量PCR是類似的,具體規則如下:1、查找和選擇目標序列設計引物和探針的第一步是得到感興趣基因的核酸序列。找到基因保守區域:基因的保守區域是指來自同一屬/種/亞型的、在某個基因上堿基序列差別很小或沒有差別的區域。根據需要,使用ClustalX或ClustalW等軟件對齊屬于同一屬/種/亞型的基因的一組序列,在對齊序列的保守區域設計引物,并確保引物結合位點處的保守序列與其它非待檢測的屬/種/亞型的堿基序列具有較大的差異。擴增產物長度(AmpliconLength):可在75-200bp之間(產物長度=下游引物位置-上游引物位置+1)。珠三角銳訊數字PCR性能特點使用數字PCR技術對436例非小細胞肺*樣品進行檢測,并挑選樣本驗證一致性。
數字PCR技術是繼一代普通PCR、二代熒光定量PCR之后的第三代PCR技術。該技術將一個樣本分成幾到幾十萬份,分配到不同的反應單元,每個單元包含一個或多個拷貝的目標分子(DNA模板),在每個反應單元中分別對目標分子進行PCR擴增;擴增結束后,將有熒光信號的微滴判讀為1,沒有熒光信號的微滴判讀為0,終根據泊松分布原理以及陽性微滴的比例,計算出待檢靶分子的濃度或拷貝數。定量:不再依賴于Ct值和標準曲線,直接給出靶序列的起始濃度,實現真正意義上的定量。更高靈敏度與特異性:數字PCR可實現萬分之一稀有樣本的定量,可用于極微量核酸樣本檢測、復雜背景下的稀有突變檢測、表達量微小差異鑒定、單細胞基因表達等方面。數字PCR在分子診斷領域將會發揮巨大的作用,數字PCR適用于生物標志物研究、拷貝數變異分析、微生物檢測、轉基因生物檢測、mRNA和miRNA檢測、基因相對表達研究等,并對遺傳病、、產前診斷的研究提供了一種全新的技術思路與手段,具有廣的、不可替代的應用前景。
數字PCR技術的出現不是為了完全取代原有分子診斷技術,而是更好的補充和完善現有技術平臺。數字PCR為不同應用場景下的多樣化核酸檢測需求提供了新的思路,尤其是在臨床檢測方面,在 性疾病早期檢測、 疾病的伴隨診斷、生殖遺傳篩查等領域展現出良好的應用前景。國產數字PCR企業在商業化應用方面,也不斷“攻城略地”。新羿生物在檢測及 疾病伴隨診斷方面開發了一系列試劑盒,并積極推進注冊臨床試驗;領航基因聚焦在血流 (膿毒癥)及呼吸道 領域,相繼推出了多款病原菌檢測試劑盒;銳訊生物聚焦于檢測,2020年其產品獲得FDA緊急授權。除此之外,在公共衛生領域,國產數字PCR企業針對食源性致病菌、鼠疫、蟲媒病毒等,也推出多種檢測試劑盒。數字PCR即Digital PCR(dPCR),它是一種核酸分子定量技術。
目前dPCR主要有兩種形式,芯片式和液滴式,但基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應器或微滴中,每個反應器的核酸模板數少于或者等于1個。這樣經過PCR循環之后,有一個核酸分子模板的反應器就會給出熒光信號,沒有模板的反應器就沒有熒光信號。根據相對比例和反應器的體積,就可以推算出原始溶液的核酸濃度。可以使用幾種不同的方法來分配樣品,包括微孔板,毛細管,油乳劑和帶有核酸結合表面的小型化腔室陣列。樣品的分配使人們可以通過假設分子種群遵循泊松分布來估計不同分子的數量,根據泊松分布的原理,反應體系中目標分子的拷貝數可以通過公式A=-ln[(N-X)/N]*N計算,從而解決了多個目標分子存在于單個液滴中的可能性。臻準推出新款數字PCR產品:AccuONE2.0數字PCR系統。華南地區微滴式數字PCR熒光通道
全自動數字PCR一體機可以適用于包括醫療檢測領域在內的多種應用場景。雙螺旋生物儀器數字PCR原理
相比于qPCR,dPCR在轉基因檢測中具有以下優勢:(1)檢測靈敏度高:理論上dPCR的靈敏度可達1個拷貝,而實際應用中dPCR的小檢出限和比較低定量限數值非常接近,所以dPCR可以在非常低的目標拷貝數下得到精確的結果;通常轉基因比參考基因(內源基因)濃度低很多;(2)前處理簡單且受基質成分干擾較小:dPCR反應效率和精密度受到食品基質成分干擾影響較小,可應用于混合基質樣品中低豐度DNA的檢測;(3)dPCR對抑制劑的敏感性較低:由于dPCR結果表示為“有熒光“或“無熒光”,即使存在抑制劑降低了熒光強度仍可以表示為“有熒光;(4)適合多重轉基因檢測:食品或飼料提取的DNA中可能包含多種轉基因片段,可以進行多重dPCR檢測,提高分析效率。同時,dPCR可以直接溯源至SI國際單位制摩爾,適合單一、雙重及多重轉基因標準物質研究,一次可識別不同的轉基因區域。下面詳細進行說明。雙螺旋生物儀器數字PCR原理
廣州雙螺旋科學儀器有限公司是以提供數字PCR,純水機,病理切片機,倍性分析儀為主的有限責任公司(自然),雙螺旋科學儀器是我國精細化學品技術的研究和標準制定的重要參與者和貢獻者。雙螺旋科學儀器致力于構建精細化學品自主創新的競爭力,將憑借高精尖的系列產品與解決方案,加速推進全國精細化學品產品競爭力的發展。