數字PCR技術的出現不是為了完全取代原有分子診斷技術，而是更好的補充和完善現有技術平臺。數字PCR為不同應用場景下的多樣化核酸檢測需求提供了新的思路，尤其是在臨床檢測方面。國產數字PCR企業在商業化應用方面，也不斷“攻城略地”。數字PCR作為當下靈敏的核酸檢測技術，盡管目前國產數字PCR企業異軍突起，在臨床市場中實現了彎道超車，但未來仍然需要聚焦客戶需求，不斷夯實底層創新，同時在檢測成本、自動化、試劑盒申報注冊、出海國際化等方面不斷努力，提供更為的解決方案。國際局勢，波譎云詭。在百年未有之大變局，實現中華民族的偉大復興，需要國內企業瞄準技術高地，以爭分奪秒的精神，解決技術"卡脖子"的難題，不斷攻堅克難，自主創新，在與國際品牌的同臺競技中，彰顯中國實力。在使用dPCR進行轉基因檢測時，通常直接參照qPCR的方法。微滴式數字PCR油滴制造

基于微滴的QX100dPCR儀，利用油包水技術，將樣品平均分配到20000個微滴油包水中，利用微滴分析儀對微滴進行分析。2012年RainDance公司推出了RainDropdPCR儀，在高壓氣體驅動下，將每個標準反應體系分割成包含100萬至1000萬個皮升級別微滴的反應乳液。數字PCR就形成了2大派別，芯片式和微滴式。不論是哪種數字PCR，其原理都是有限稀釋，終點PCR和泊松分布。將含有核酸模板的標準PCR反應體系，平均分配成幾萬個PCR反應，分配到芯片或微滴中，使每個反應中盡可能含有一個模板分子，進行單分子模板PCR反應，通過讀取熒光信號的有或無進行計數，經過統計學泊松分布的校準進行定量。德國數字PCR性能特點數字PCR的應用甚廣，除了可應用于進行突變的檢測以外，也可運用于基因擴增的檢測。

dPCR的測量結果通常表示為含量，即拷貝數值或轉基因質量百分比，而QPCR結果通常表示為拷貝數的質量分數。目前市場上可購買到大多數轉基因標準物質，以qPCR定值的標準物質是以拷貝數（單倍體基因組當量）的質量分數來表示特性量；以dPCR定值的標準物質直接采用拷貝數比例來表示特性量。不同方法使用不同的表示方式，會造成測量結果不可比。因此質量分數、拷貝數和拷貝數比例之間的關系需要轉化，才能得到單位一致，數值可比的數據。EU聯合研究中心建議使用轉換因子從拷貝數換算到質量分數。

數字PCR平臺的評價指標有：分割單元數，熒光通道數，操作復雜性和污染風險。但是重要的是檢測準確性，評估數字PCR平臺的一種方法是使用多個數字PCR平臺互相驗證，另一種方法是使用定值準確的標準物質。目前的三代的PCR技術各有各的優缺點，也各有各的應用領域，并不是一代取代一代的關系。技術的不斷進步給PCR技術注入了新的活力，使其能解鎖一個又一個的應用方向，使核酸檢測更方便、更準確。目前dPCR儀器的價格仍然十分昂貴，但隨著系統加工工藝的改進以及使用較便宜的材料，聚合成更小的體積[556]，其價格將會不斷的降低，使其應用到更多的檢測中。3D數字PCR是基于納米流體芯片進行檢測，通過一次檢測，將樣品分到數千個單獨的PCR。

作為時下的熱點技術，數字PCR是將核酸樣品分配到大量單獨、平行的微反應單元（nL，納升級別）中，使得每個反應單元中盡可能含有1個模板分子，并在此基礎上進行擴增、檢測和分布統計，從而實現靶標分子的比較 計數。（圖：數字PCR技術原理）根據微反應單元的不同形式，數字PCR產品可分為微板式、微滴式和芯片式等。目前，市場上主要的數字PCR產品主要是基于微滴式和芯片式，如Bio-Rad公司的QX200微滴式系統和ThermoFisher公司的QuantStudio系統等。與一、二代PCR技術相比，數字PCR具有很多優勢：一是特異性、靈敏性均有顯著提高；二是在不依賴內參和標準曲線的前提下，可直接得到比較 量化指標；三是微反應單元相互獨立、封閉，避免了PCR抑制劑及不同核酸分子擴增產物間的相互干擾，準確度和可重復性較高。dPCR儀器在操作中集成了前處理以減少手工移液和樣品轉移的操作，增加了通量，并在價格上具有優勢。蘇州數字PCR儀器

數字PCR作為研發階段的驗證方案之一。微滴式數字PCR油滴制造

數字PCR的引物和探針設計規則同熒光定量PCR是類似的，具體規則如下：1、查找和選擇目標序列設計引物和探針的第一步是得到感興趣基因的核酸序列。找到基因保守區域：基因的保守區域是指來自同一屬/種/亞型的、在某個基因上堿基序列差別很小或沒有差別的區域。根據需要，使用ClustalX或ClustalW等軟件對齊屬于同一屬/種/亞型的基因的一組序列，在對齊序列的保守區域設計引物，并確保引物結合位點處的保守序列與其它非待檢測的屬/種/亞型的堿基序列具有較大的差異。擴增產物長度（AmpliconLength）：可在75-200bp之間（產物長度=下游引物位置-上游引物位置+1）。微滴式數字PCR油滴制造

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