摘要: 本發明提供了一種磁性微球分離純化納豆激酶的方法。將表面偶聯有親和配基的磁性微球加入到納豆激酶的發酵液中，在室溫下緩慢攪拌充分混合，使納豆激酶特異性地吸附在磁性微球表面；采用磁鐵將吸附有納豆激酶的磁性微球從發酵液中分離出來，用緩沖溶液清洗一次去除雜質，再用解析液進行解析，收集到納豆激酶的洗脫液；***經過冷凍干燥得到納豆激酶產品。分離后納豆激酶的活力為８５％，純化因子為６．０。本發明具有周期短、操作簡單、生產成本低且易于規模化生產等優點。 利要求: 一種磁性微球分離純化納豆激酶的方法，其特征在于，所述的納豆激酶分離純化方法包括以下幾個步驟：（１）納豆激酶發酵液的制備從固體培養基上挑取納豆激酶的單菌落接入２０－１００ｍＬ的種子培養基中，搖床中培養１２－２４ｈ，按２％－６％ 接種量接入發酵液體培養基中，在２５－３７℃下發酵罐培養２４－４８ｈ，液體發酵結束后，通過離心除去菌體，得到納豆激酶發酵液；（２）親和配基在磁性微球上的固定化將自制的磁性高分子微球進行表面功能化修飾得到表面含有環氧功能基團的磁 性微球，在５０－８０℃條件下，以氫氧化鈉為催化劑，進行親和配基的固定化反應，獲得表面含有親和南京分離純化微球哪家強

磁性高分子微球的制備
目前制備磁性高分子納米微球的方法主要分為五類，其主要包括：包埋法、原位法、單體聚合法、界面沉積法及自組裝法。
2.1包埋法
包埋法是將聚合物溶解在含有磁性超微粒子的溶液中，然后加入大量的沉淀劑，通過交聯、絮凝、霧化、沉積、蒸發等手段使高分子物質沉析在磁性粒子表面形成具有核殼結構的復合微球。高分子物質與磁性粒子主要通過范德華力、氫鍵、螯合作用或共價鍵等作用力結合。Li等通過化學共沉淀法合成納米粒子Fe3O4磁核，以殼聚糖為包裹材料包被自制的磁核，采用乳化交聯法制備了具有核-殼結構的磁性高分子微球-殼聚糖磁性微球，并偶聯肝素配基得到了一種新型親和磁性微球。所得親和磁性微球具有較窄的粒徑分布、形狀規整，粒徑在50nm左右。將磁分離技術應用于凝血酶的分離純化，得到了較好的效果（酶比活達1879.71U/mg，得率85%，純化倍數11.057，為傳統柱層析法的兩倍）。Chi?riuc等將含Fe2+和Fe3+溶液逐滴加入殼聚糖的NaOH溶液中制的可用于負載頭孢霉素的磁性殼聚糖微球。
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常用的純化方法冷凍結晶法 　　冷凍結晶法是在低溫的條件下，依據混合脂肪酸各組分的凝固點差異進行純化，進而達到純化多不飽和脂肪酸的目的。將混合脂肪酸溶解在**或乙醇中，置于低溫下，在溶液中短鏈脂肪酸較長鏈脂肪酸的溶解度低，飽和脂肪酸較不飽和脂肪酸的溶解度低，這種溶解度差異隨溫度降低表現更為。 　　冷凍結晶法工藝原理簡單，操作方便，有效成分不易發生變性反應。但其操作過程中溫度要求苛刻，需要回收大量的有機溶劑，純化效率不高，這限制了大規模的生產，但可以用于生產低成本的保健品類，從而滿足中低層消費者的需求。

磁性高分子微球是近年發展起來的一種新型磁性材料，是通過適當方法將磁性無機粒子與有機高分子結合形成的具有一定磁性及特殊結構的復合微球。磁性復合微球不僅具有普通高分子微球的眾多特性還具有磁響應性，所以不僅能夠通過共聚及表面改性等方法賦予其表面功能基 (如－OH、－COOH、－CHO、－NH2,等)，還能在外加磁場作用下具有導向功能。 結合方式 ①與高分子先結合成微球，磁粉再吸附其表面； ②磁粉和高分子先結合成微球再吸附； ③磁粉、、高分子一起混合經均勻化后再微球化． Devineni等人合成 magnetic microsphers methotrexate (MM-MTX) 載體用以**，MTA通過2—二甲胺甲基—1—乙基鏈接在磁性粒子的表面，通過水解可以釋放．但是實驗發現在45min內又重新分配，導致小鼠的死亡．此類問題有待進一步研究解決．

在酶催化領域：微球作為酶固定的載體可以保持酶的高度專一性和催化效率；提高酶的穩 定性和壽命；減小酶對產品的污染；實現生產連續化和酶的循環使用。微球也可以用于催 化劑的載體使得催化劑易于回收使用。 在化工領域：微球已***地添加到油漆、涂料、造紙、塑料以改善產品的抗刮性，提高產 品的耐磨性，及光學性能。 總之納米微球材料應用非常***，幾乎滲透到所有的領域，納米材料科學家不斷地開發出 新技術來賦予納米微球新的光,電,磁,等各種功能, 使它為人類創造無限可能，以滿足現代產 業關鍵材料和技術的需求。 上海分離純化微球制造廠家

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如何制作納米微球呢？
離子交聯法是制作納米微球的基本方法之一，適用于以殼聚糖、海藻酸鈉等
為材料的納米微球。其主要原理是作為***載體的材料通過離子交聯法從乳
液中析出，同時通過氫鍵相互作用和疏水相互作用將***包埋在載體中，從
而制備成載藥微球。該方法制備條件溫和，整個過程不使用對人體有害的試
劑，也成為載藥微球的理想制備方法之一。
納米微球的典型制備方法還有“乳化-溶劑揮發法”和“微流控法”。“乳
化-溶劑揮發法”是將模型***先溶解于有機溶劑中,然后滴加到含有表面活
性劑的水相中,在均質機的高速剪切下形成油相/水相型乳液,再通過常壓或減
壓方式除去乳液分散相中的揮發性有機溶劑,使納米粒硬化,***通過冷凍干
燥從水性混懸液中收集納米粒。“微流控法”是一種在微米尺度的通道中操
控兩種或幾種互不相溶的微小體積液體,連續、可控地生產具有高度單分散尺
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