對于雙光子（2P）鈣成像而言，離焦和近表面熒光激發是兩個*da的深度限制因素，而對于三光子成像這兩個問題大大減小，但是三光子成像由于熒光團的吸收截面比2P要小得多，所以需要更高數量級的脈沖能量才能獲得與2P激發的相同強度的熒光信號。功能性三光子顯微鏡比結構性三光子顯微鏡的要求更高，它需要更快速的掃描，以便及時采樣神經元活動；需要更高的脈沖能量，以便在每個像素停留時間內收集足夠的信號。復雜的行為通常涉及到大型的大腦神經網絡，該網絡既具有局部的連接又具有遠程的連接。要想將神經元活動與行為聯系起來，需要同時監控非常龐大且分布guangfan的神經元的活動，大腦中的神經網絡會在幾十毫秒內處理傳入的刺激，要想了解這種快速的神經元動力學，就需要MPM具備對神經元進行快速成像的能力。快速MPM方法可分為單束掃描技術和多束掃描技術功能性多神經元鈣成像是一種通過記錄神經元內Ca2+信號變化,監測大量神經元動作電位的光學記錄技術。寧波光遺傳鈣成像動物行為學

傳統的寬場熒光顯微鏡由于光散射的影響，只能夠對大腦淺層的神經元或在離體組織上進行成像，共聚焦顯微鏡由于光損傷較大，一般也只用于離體鈣成像。隨著熒光顯微鏡技術的迅速發展，在體鈣成像技術得到了蓬勃發展。雙光子熒光顯微鏡能夠在進行在體成像的時候實現高分辨率和高信噪比。例如，用雙光子顯微鏡對海馬樹突棘的鈣離子信號進行成像，研究神經元突觸后長時程yizhi；觀察小鼠運動皮層神經元在嗅覺選擇任務中刺激相關電位等等。不過，這些實驗還是需要對動物進行麻醉和固定，而神經科學領域很多研究更希望能夠對自由活動的動物進行研究。合肥inscopix鈣成像聯系方式鈣成像技術發現鈣離子產生各種各樣的胞內信號。

nVista神經元超微鈣成像系統是可以在自由活動的動物上進行大范圍的動態熒光成像的設備。通過nVist，您可以視覺化細胞活動，同步行為學，以及長期追蹤神經環路的活動。nVista被應用于全球的研究機構中，產生了影響力的大數據庫。主要特征：利用GCamp鈣離子探針進行成像·功能完整的數據采集軟件，實現對焦，調焦，行為同步化單細胞分辨率下，可同時捕獲成百上千神經元活動長時間追蹤細胞，追蹤時間可長達數月電子對焦，保證視野范圍的恒定自由動物行為學：可運用標準行為學測量方法，行為操作箱，迷宮，曠場等可進行皮層，深部核團，以及腦干，中腦等區域的成像記錄動物無需進行適應性訓練鈣離子成像+自由活動行為學1.錨定特殊細胞類型，例如特定的receptor/promotor/geneticmarker2.單細胞的空間分辨率，可以分析細胞在空間內的mapping和編碼信息3.動物可在大范圍的曠場內自由活動4.長時程追蹤同一細胞的放電規律變化：用于學習，記憶，藥物成癮等研究。5.可對腦內的深部核團進行記錄nVista神經元超微鈣成像系統成像效果好。神經元超微鈣成像系統技術參數專業的數據采集軟件Inscopix數據采集軟件可記錄成百上千個神經元細胞。電子調焦功能，可通過軟件實現物理調焦。

與傳統的單光子寬視野熒光顯微鏡相比，多光子顯微鏡（MPM）具有光學切片和深層成像等功能，這兩個優勢極大地促進了研究者們對于完整在體大腦深處神經的了解與認識。2019年，JeromeLecoq等人從大腦深處的神經元成像、大量神經元成像、高速神經元成像這三個方面論述了相關的MPM技術。想要將神經元活動與復雜行為聯系起來，通常需要對大腦皮質深層的神經元進行成像，這就要求MPM具有深層成像的能力。激發和發射光會被生物組織高度散射和吸收是限制MPM成像深度的主要因素，雖然可以通過增加激光強度來解決散射問題，但這會帶來其他問題，例如燒壞樣品、離焦和近表面熒光激發。增加MPM成像深度比較好的方法是用更長的波長作為激發光。通過鈣成像技術發現當神經元活動的時候，胞內鈣離子濃度能上升 10 - 100 倍。

目前有三種在神經元上填充鈣離子指示劑的方法，且都可以用于體內和體外研究。第一種方法是利用玻璃吸管將膜滲透性鹽或葡聚糖形式的指示劑注入單個神經元中。此方法方便實驗者控制單個神經元內的鈣離子指示劑濃度且信噪比較高。第二種是利用“批量加載”的方法將鈣離子指示劑染料負載神經元，觀察對象為一群神經元。盡管此方法可能導致一些膠質細胞也被指示劑所標記，但提高了整體神經元的標記百分比，使研究者得以觀察到一群神經元內動作電位相關性的活動。第三種也較為常用，通過病毒轉染的方式使其基因編碼鈣離子指示劑。（A）單細胞注射法；（B）networkloading法；（C）通過病毒轉染使其基因編碼鈣離子指示劑（expressionofgeneticallyencodedcalciumindicators,GECI）想要同時觀察軸突和樹突的鈣離子信號，大視野是很重要的。熒光顯微鈣成像聯系方式

鈣成像技術能直接測量神經元和神經元組織中動態的鈣流動。寧波光遺傳鈣成像動物行為學

解決鈣離子信號和BOLD信號轉換：功能核磁共振成像主要依賴于神經元興奮后局部耗氧與血流振幅的不一致，通過測定血氧水平依賴性（BOLD）信號間接反映神經元活動。而鈣成像技術則是直接通過鈣離子濃度變化反映神經元活動。將這兩種技術聯用，需要考慮BOLD信號和鈣離子濃度變化之間的轉換。研究人員通過卷積函數比較好化的將鈣離子信號轉換為BOLD信號，實現這兩者之間比較大的關聯。研究人員利用鈣離子指示劑工具小鼠發現在低頻刺激下（0.009–0.08赫茲），小鼠皮層鈣離子活動變化與BOLD信號的一致性比較好。此外，鈣離子活動變化與BOLD功能連接的關聯存在區域的依賴性：鈣離子和BOLD連接強度相關性在桶狀皮層與同側半球內的腦區呈正相關關系（同步化），但與對側半球內的腦區呈負相關。這種區域功能依賴性表明BOLD的連接來自于不同細胞群的協同神經活動。寧波光遺傳鈣成像動物行為學

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