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芬蘭腦片膜片鉗電生理技術

來源: 發布時間:2023-02-11

膜片鉗技術實現了小片膜的孤立和高阻封接的形成,由于高阻封接使背景噪聲水平降低,相對地增寬了記錄頻帶范圍,提高了分辨率。另外,它還具有良好的機械穩定性和化學絕緣性。而小片膜的孤立使對單個離子通道進行研究成為可能。單通道電流1.典型的單通道電流呈一種振幅相同而持續時間不等的脈沖樣變化。他有兩個電導水平,即O和1,分別對應通道的關閉和開效狀態。2.有的矩形脈沖簇狀發放時,通道電流不在同一水平,可以明顯觀察到不同數目離子通道所形成的電流臺階,從而可推斷出被測膜片的通道數目。3.有的通道可記錄到圓滑型和方波形兩種形式。4.有些通道開放活動是持續開放,中間被閃動樣的關閉所中斷,形成burst開放。有些通道開放活動是簇狀開放與短期平靜交替出現,形成簇狀發放串(Cluster)在青蛙肌細胞上用雙電極鉗制膜電位的同時,記錄到ACh啟動的單通道離子電流,從而產生了膜片鉗技術。芬蘭腦片膜片鉗電生理技術

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80年代初發展起來的膜片鉗技術(patchclamptechnique)為了解生物膜離子單通道的門控動力學特征及通透性、選擇性膜信息提供了直接的手段。該技術的興起與應用,使人們不僅對生物體的電現象和其他生命現象更進一步的了解,而且對于疾病和藥物作用的認識也不斷的更新,同時還形成了許多病因學與藥理學方面的新觀點。膜片鉗技術是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的或多個的離子通道分子活動的技術。它和基因克隆技術(genecloning)并架齊驅,給生命科學研究帶來了巨大的前進動力。高通量全自動膜片鉗專題通過膜片鉗放大器的控制鍵將微電極的連接電位(junction potentials)調至零位。

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ePatch的設計的一些亮點還包括:可以在軟件中伴隨數據進行實驗記錄,你不用再專門拿一個實驗記錄本了,也不用再擔心本本上記錄的內容找不到對應的數據了,系統會把他們一一對應起來。電壓電流刺激模式的編輯更為傻瓜,眾多的模塊,直接拖拽就可以,還伴隨著示例圖,讓你對你編輯的程序一目了然。實時的全細胞參數估算,包括封接電阻,膜電容,膜電阻等重要參數強大的在線分析功能,包括電壓鉗模式下的I/V graph,event detection,FFT,以及電流鉗模式下的AP threshold detection,AP frequency,AP slope等數據可保存成多種格式,你要是個程序達人,可以支持使用Matlab進行數據分析,如果沒有這樣的經驗也沒有問題,數據可以保存成.abf用的Clampfit直接分析。

對藥物作用機制的研究,在通道電流記錄中,可分別于不同時間、不同部位(膜內或膜外)施加各種濃度的藥物,研究它們對通道功能的可能影響,了解那些選擇性作用于通道的藥物影響人和動物生理功能的分子機理。這是目前膜片鉗技術應用普遍的領域,既有對西藥藥物機制的探討,也普遍用在重要藥理的研究上。如開麗等報道細胞貼附式膜片鉗單通道記錄法觀測到人參二醇組皂苷可控制正常和“缺血”誘導的大鼠大腦皮層神經元L-型鈣通道的開放,從而減少鈣內流,對缺血細胞可能有保護作用。陳龍等報道采用細胞貼附式單通道記錄法發現烏頭堿對培養的Wistar大鼠心室肌細胞L-型鈣通道有阻滯作用。全細胞膜片鉗記錄是應用較早,也是普遍的鉗位技術。

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高阻封接問題的解決不僅改善了電流記錄性能,還隨之出現了研究通道電流的多種膜片鉗方式。根據不同的研究目的,可制成不同的膜片構型。細胞吸附膜片(cell-attachedpatch)將兩次拉制后經加熱拋光的微管電極置于清潔的細胞膜表面上,形成高阻封接,在細胞膜表面隔離出一小片膜,既而通過微管電極對膜片進行電壓鉗制,分辨測量膜電流,稱為細胞貼附膜片。由于不破壞細胞的完整性,這種方式又稱為細胞膜上的膜片記錄。此時跨膜電位由玻管固定電位和細胞電位決定。因此,為測定膜片兩側的電位,需測定細胞膜電位并從該電位減去玻管電位。從膜片的通道活動看,這種形式的膜片是極穩定的,因細胞骨架及有關代謝過程是完整的,所受的干擾小。膜片鉗技術已成為研究離子通道的"金標準"。美國全細胞膜片鉗

在細胞膜的電學模型中,膜電容和膜電導構成了一個并聯回路。芬蘭腦片膜片鉗電生理技術

離子通道結構研究∶目前,絕大多數離子通道的一級結構得到了闡明但根本的還是要搞清楚各種離子通道的三維結構,在這方面,美國的二位科學家彼得·阿格雷和羅德里克麥金農做出了一些開創性的工作,他們到用X光繞射方法得到了K離子通道的三維結構,二位因此獲得2003年諾貝系化學獎。有關離子通道結構不是本PPT的重點,可參考楊寶峰的<離子通道藥理學>和Hill的<lonicChannelsOfExcitableMembranes》。對離子通道功能的研究,主要采用記錄離子通道電流來間接反映離子通道功能,目前有如下兩種技術:電壓鉗技術(VoltageClamp),膜片鉗(patchclamp)技術。芬蘭腦片膜片鉗電生理技術

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