靜息狀態(tài)下大部分神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度約為50-100nM,而細(xì)胞興奮時(shí)鈣離子濃度能瞬間上升10-100倍,增加的鈣離子對(duì)于突觸囊泡胞吐釋放神經(jīng)遞質(zhì)的過程必不可少。眾所周知,只有游離鈣才具有生物學(xué)活性,而細(xì)胞質(zhì)內(nèi)鈣離子濃度由鈣離子的內(nèi)外流平衡所決定,同時(shí)也受鈣結(jié)合蛋白的影響。細(xì)胞外鈣離子內(nèi)流的方式有很多種,其中包括電壓門控鈣離子通道、離子型谷氨酰胺受體、煙堿型膽堿能受體(nAChR)和瞬時(shí)受體電位C型通道(TRPC)等。神經(jīng)元鈣成像的原理就是利用特殊的熒光染料或鈣離子指示劑將神經(jīng)元中鈣離子濃度的變化通過熒光強(qiáng)度表現(xiàn)出來,以反映神經(jīng)元活性。該方法可以同時(shí)觀察多個(gè)功能或位置相關(guān)的腦細(xì)胞。神經(jīng)元鈣成像的原理是利用特殊的熒光染料或鈣離子指示劑將神經(jīng)元中鈣離子濃度的變化通過熒光強(qiáng)度表現(xiàn)出來。南京熒光鈣成像多少錢
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目前可用的指示劑較多,根據(jù)熒光光譜、與鈣離子親和力及其化學(xué)特性的不同大致分為化學(xué)性鈣離子指示劑和基因編碼鈣離子指示劑。前者指可特異性與鈣離子結(jié)合的小分子,常用的有fura-2、indo-1等;而后者主要指來源于綠色熒光蛋白GFP及其變異體的蛋白質(zhì),可與鈣調(diào)蛋白和肌球蛋白輕鏈激酶M13域結(jié)合,常用的有GCaMP、TN-XXL等,其中GCaMP5G和GCaMP6被廣泛應(yīng)用于在體鈣成像研究中。生物熒光蛋白:Aequorin是水母熒光素(coelenterazine)通過硫酸酯鍵或過氧化鍵緊緊連到脫輔水母發(fā)光蛋白上形成的,遇到鈣離子就發(fā)出470nm藍(lán)光,可以作為鈣離子的檢測(cè)試劑;化學(xué)鈣離子指示劑:Fura-2可在紫外光下被jihuo且發(fā)射出505-520nm光;基于FRET的基因編碼的鈣指示劑;單個(gè)熒光基因編碼的鈣指示劑。
鈣成像技術(shù)在許多領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用,以下是一些常見的應(yīng)用場(chǎng)景:1.神經(jīng)科學(xué)研究:鈣成像技術(shù)被廣泛應(yīng)用于研究神經(jīng)元活動(dòng)和神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的功能。可以觀察神經(jīng)元的鈣離子動(dòng)態(tài)變化,揭示神經(jīng)元的興奮性和抑制性活動(dòng),研究神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)的連接和信息傳遞。2.細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)研究:鈣離子在細(xì)胞內(nèi)起著重要的信號(hào)傳導(dǎo)作用。鈣成像技術(shù)可以用于研究細(xì)胞內(nèi)鈣離子的濃度變化,揭示細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)的機(jī)制和調(diào)控過程。3.細(xì)胞凋亡研究:鈣離子在細(xì)胞凋亡過程中扮演重要角色。鈣成像技術(shù)可以用于觀察細(xì)胞內(nèi)鈣離子的變化,研究細(xì)胞凋亡的啟動(dòng)和執(zhí)行過程。4.藥理學(xué)研究:鈣成像技術(shù)可以用于評(píng)估藥物對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度的影響。可以研究藥物的作用機(jī)制、藥物的劑量效應(yīng)關(guān)系等。5.疾病研究:鈣成像技術(shù)可以應(yīng)用于研究與鈣離子信號(hào)傳導(dǎo)相關(guān)的疾病,如神經(jīng)退行性疾病、心血管疾病等。可以揭示疾病發(fā)生及發(fā)展的機(jī)制,為疾病的診斷和診療提供依據(jù)。總之,鈣成像技術(shù)在神經(jīng)科學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、藥理學(xué)和疾病研究等領(lǐng)域都有廣泛的應(yīng)用,可以幫助揭示生物過程的機(jī)制和疾病的發(fā)生及發(fā)展過程。有了鈣成像技術(shù),原本悄無聲息的神經(jīng)活動(dòng)就變成了一幅斑斕閃爍的壯觀影像。
紫外光激發(fā)Ca2+熒光探針:Fura-2和Indo-1都是紫外光激發(fā)的雙波長Ca2+熒光指示劑,也是目前較常用的比率型鈣離子熒光探針。與其他代的熒光指示劑相比,它們的熒光信號(hào)更強(qiáng),對(duì)Ca2+的選擇性也更強(qiáng)。比率指示劑會(huì)在與Ca2+結(jié)合后會(huì)改變吸收/發(fā)射特性。以雙波長激發(fā)指示劑Fura-2為例。如圖2所示,低Ca2+濃度下,F(xiàn)ura-2在~380nm處激發(fā),高Ca2+濃度下,在~340nm處激發(fā)。光譜由兩個(gè)峰組成:左側(cè)較短波長的吸收峰隨Ca2+濃度的增加而增大,右側(cè)較長波長的吸收峰隨Ca2+濃度的增加而減小。通過340/380nm交替激發(fā),獲取在510nm處對(duì)應(yīng)的發(fā)射光熒光強(qiáng)度的比率,就可以對(duì)Ca2+濃度進(jìn)行定量的測(cè)量。因?yàn)镕ura-2結(jié)果準(zhǔn)確,且不易被漂白,所以得到了普遍使用。鈣離子成像可以追蹤神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢弧C绹窠?jīng)細(xì)胞鈣成像什么價(jià)格
小鼠頭戴式微型顯微鏡為后續(xù)清醒動(dòng)物腦功能鈣成像研究提供了一套可靠的顯微成像系統(tǒng)。南京熒光鈣成像多少錢
nVista神經(jīng)元超微鈣成像系統(tǒng)是可以在自由活動(dòng)的動(dòng)物上進(jìn)行大范圍的動(dòng)態(tài)熒光成像的設(shè)備。通過nVist,您可以視覺化細(xì)胞活動(dòng),同步行為學(xué),以及長期追蹤神經(jīng)環(huán)路的活動(dòng)。nVista被應(yīng)用于全球的研究機(jī)構(gòu)中,產(chǎn)生了影響力的大數(shù)據(jù)庫。主要特征:利用GCamp鈣離子探針進(jìn)行成像功能完整的數(shù)據(jù)采集軟件,實(shí)現(xiàn)對(duì)焦,調(diào)焦,行為同步化單細(xì)胞分辨率下,可同時(shí)捕獲成百上千神經(jīng)元活動(dòng)長時(shí)間追蹤細(xì)胞,追蹤時(shí)間可長達(dá)數(shù)月電子對(duì)焦,保證視野范圍的恒定自由動(dòng)物行為學(xué):可運(yùn)用標(biāo)準(zhǔn)行為學(xué)測(cè)量方法,行為操作箱,迷宮,曠場(chǎng)等可進(jìn)行皮層,深部核團(tuán),以及腦干,中腦等區(qū)域的成像記錄動(dòng)物無需進(jìn)行適應(yīng)性訓(xùn)練鈣離子成像+自由活動(dòng)行為學(xué)1.錨定特殊細(xì)胞類型,例如特定的receptor/promotor/geneticmarker2.單細(xì)胞的空間分辨率,可以分析細(xì)胞在空間內(nèi)的mapping和編碼信息3.動(dòng)物可在大范圍的曠場(chǎng)內(nèi)自由活動(dòng)4.長時(shí)程追蹤同一細(xì)胞的放電規(guī)律變化:用于學(xué)習(xí),記憶,藥物成癮等研究。5.可對(duì)腦內(nèi)的深部核團(tuán)進(jìn)行記錄nVista神經(jīng)元超微鈣成像系統(tǒng)成像效果好。神經(jīng)元超微鈣成像系統(tǒng)技術(shù)參數(shù)專業(yè)的數(shù)據(jù)采集軟件Inscopix數(shù)據(jù)采集軟件可記錄成百上千個(gè)神經(jīng)元細(xì)胞。電子調(diào)焦功能,可通過軟件實(shí)現(xiàn)物理調(diào)焦。南京熒光鈣成像多少錢