培養基制備基本方法編輯語音培養基配方的選定同一種培養基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此，除所用的是標準方法，應嚴格按其規定進行配制外，一般均應盡量收集有關資料，加以比較核對，再依據自己的使用目的加以選用，記錄其來源。培養基的制備記錄每次制備培養基均應有記錄，包括培養基名稱，配方及其來源，和各種成份的牌號。**終pH值、消毒的溫度和時間制各的日期和制備者等，記錄應復制一份，原記錄保存備查，復制記錄隨制好的培養基一同存放、以防發生混亂。培養基成分的稱取培養基的各種成分必須精確稱取并要注意防止錯亂，**好一次完成，不要中斷?？蓪⑴浞街糜诎鴤?，每稱完一種成分即在配方上做出記號，并將所需稱取的藥品一次取齊，置于左側，每種稱取完畢后，即移放于右側。完全稱取完畢后，還應進行一次檢查。培養基各成份的混合和溶化培養基所用化學藥品均應是化學純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養基中，使細菌不易生長。**好使用不銹鋼鍋加熱溶化，也可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時、可先用溫水加熱并隨時擾動，以防焦化、如發現有焦化現象、該培養基即不能使用。取材過程應嚴格按照操作規程執行，制備出的血清要經過嚴格的質量鑒定。嘉定區常規臨床微生物檢驗培養基質量保證

    二、培養基培養基有天然、人工兩種。一般實驗室使用的是RPMI-1640粉末培養基，以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）調pH至，若pH值超過，則大多數細胞不能生長。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經滅菌μm孔徑濾膜濾過處理。三、血清培養中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高壓滅菌，無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補體，置4℃冰箱存放待用。配制時含量視培養細胞種類、時間而定，一般用10—15%。由于血清成分復雜、條件不易控制，可選用無血清培養基。四、***素為防止培養時期細菌的污染，可在培養基中添加適當***素，一般用量與組織細胞培養相同：卡那霉素100單位/毫升，或雙抗--青霉素100單位/毫升，鏈霉素100微克/毫升。五、植物血凝素（PHA）非增殖期的細胞不能制備染色體，如人外周血淋巴細胞，但在離體培養過程中，在PHA的作用下，可被刺激轉化為淋巴母細胞而進入有絲分裂。經實驗測定其分裂高峰分別于培養后44-48小時和68-72小時。PHA有粘多糖，蛋白質兩種重要成分。粘多糖促使有絲分裂，蛋白質起凝集作用。PHA***的細胞數隨其濃度而增加，直至全部免疫活性細胞均被***為止，但PHA濃度過高會引起凝集，一般采用4%濃度為好。普陀區專注臨床微生物檢驗培養基售后服務一般實驗室里以玻璃蒸餾器制備的雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。

    調整pH值到6。分裝，滅菌，備用。該培養基用于培養和保存靈芝、平菇、香菇等食用菌菌種。***的培養基在植物組織培養時，通過調節IAA和CTK的比值能影響愈傷組織分化出根或芽。CTK/IAA高時，愈傷組織分化芽。CTK/IAA低時，分化根；CTK/IAA比例適中維持愈傷組織不分化。愈傷組織誘導培養基制備以MS培養基母液為基礎，向潔凈鋁鍋中順序加入大量元素20×母液100mL，微量元素100×母液20mL，鐵鹽100×母液20mL，維生素100×母液20mL，肌醇200×母液10mL，甘氨酸200×母液10mL，配制得MS培養基后，再加入·L-1的BA8mL，·L-1的NAA8mL。然后加入實際配制培養基體積約2/3-3/4的蒸餾水，加入40g蔗糖后攪拌使其溶化，用·L-1的NaOH和mol·L-1的HCl調整pH值至。加入14g瓊脂，將鋁鍋置于電爐上，攪拌加熱使瓊脂完全溶化，然后用蒸餾水定容至終體積2L，繼續加熱幾分鐘使之混合均勻后分裝于三角瓶中。******葉片愈傷組織誘導取一無菌培養皿，用解剖刀切取1-2片無菌苗葉片置于無菌培養皿中，并用解剖刀將葉片切成2mm2左右的小片，然后將其接種于準備好的培養基上，每瓶接種5小片，一共接種6瓶。接種后的三角平置于24條件下黑暗培養1周。

    蒸餾水）919mlSE培養基·6H2OFe—EDTA1mlA5solution1000×1mldistilledwater958mlSoilExtract（土壤提取液）配置方法取花園土未施過肥，加入蒸餾水1000毫升，瓶口用透氣塞封口，在水浴中沸水加熱2小時，冷卻數小時，在無菌條件下過濾，取上清液，將滅菌蒸餾水加入上清液至總體積1000毫升。土壤提取液保存在4℃備用。CompositionoftheA5solutionAddto100mlofdistilledwater:（加入100ml的蒸餾水）（NH4）：將EDTA和FeCl3·6H2O分別溶于水和HCl（），混勻即可。Na2EDTA1gdistilledwater50mlFeCl3·6H2O81mgHCl（）50mlPr培養基Preparation:to997mLofglass-distilledwater,addgproteosepeptone,gagar,andthefollowingstocksolutions:workingsolutiong/()1mlA5溶液和EDTA-Fe溶液配制方法同上。***培養基薩市（Sabouraud’s）培養基蛋白胨10g，瓊脂20g，麥芽糖40g，水1000ml先把蛋白胨、瓊脂加水后，加熱，不斷攪拌，待瓊脂溶解后，加入40g麥芽糖（或葡萄糖），攪拌，使它溶解，然后分裝，滅菌，備用。本培養菌是培養許多種類***所常用的。馬鈴薯糖瓊脂培養基把馬鈴薯洗凈去皮，取200g切成小塊，加水1000ml，煮沸半小時后，補足水分。在濾液中加入10g瓊脂，煮沸溶解后加糖20g。價格昂貴，是構成動物細胞培養對生產成本的主要部分之一。

    應重新制備。待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分完全溶化。迄至煮沸。如為瓊脂培養基，應先用一部分水將瓊脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中，因蒸發而丟失的水分，**后必須加以補足。培養基pH的初步調整培養基各成分完全溶解后，應進行pH的初步調正，因培養基在加熱消毒過程中、pH會有所變化，例如，牛肉浸液約可降低。而腸浸液pH卻會有***的升高。因此，對這個步驟，操作者應隨時注意探索經驗、以期能掌握培養基的**終pH，保證培養基的質量。pH調正后，還應將培養基煮沸數分鐘，以利培養基沉淀物的析出。培養基注意事項編輯語音培養基在使用前通過高壓或過濾滅菌。防止污染應該注意以下事項：確認工作細胞庫是否被污染，確認毒種工作種子批是否被污染，確認所用培養基及其添加成分（如小牛血清、NaHCO3等）是否被污染，均可用細菌、***及支原體無菌試驗來確認并排除。同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。實際生產中，可以從配制好的培養液中取少量加入營養瓊脂于恒溫培養箱內培養，48小時即可觀察有無污染。其它：高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證，確保滅菌和除菌效果。無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染，有些國家要求無細菌噬菌體污染。寶山區現代臨床微生物檢驗培養基售后服務

并應具備適當的監測系統。嘉定區常規臨床微生物檢驗培養基質量保證

    血清還含有一些微量元素和離子，他們在代謝***中起重要作用，如SeO3、硒等。血清培養基主要問題1．血清的成份可能有幾百種之多，對其準確的成份、含量及其作用機制不清楚，尤其是對其中一些多肽類生長因子、***和脂類等尚未充分認識，這給研究工作帶來許多困難。2．血清都是批量生產，各批量之間差異很大，而且血清保存期至多一年，因此，要保證每批血清的相似性極為困難，從而使實驗的標準化和連續性受到限制。3．對大多數細胞，在體內狀態，血清不是它們接觸的生理學液體，只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清，因此使用血清有可能改變某種細胞在體內的正常狀態，血清可能促進某些細胞的生長（成纖維細胞）同時***另一類細胞生長（表皮細胞）。4．血清含一些對細胞產生毒性的物質，如多胺氧化酶，能與來自高度繁殖細胞的多胺反應（如精胺、亞精胺）形成有細胞毒性作用的聚精胺。補體、抗體、細菌***等都會影響細胞生長，甚至造成細胞死亡。5．動物個體不同，血清產地、批號不同，每批質量差異甚大，其成分不能保持一致。6．取材中可能帶入支原體、病毒，對細胞產生潛在影響，可能導致實驗失敗或實驗結果不可靠性。7．大規模生產中，血清來源越來越困難。嘉定區常規臨床微生物檢驗培養基質量保證

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