培養基化學分類編輯語音培養基天然培養基天然培養基是指一類利用動物、植物或微生物體包括其提取物制成的培養基。例如。牛肉膏蛋白胨培養基、麥芽汁培養基和LB培養基等。常用的天然有機營養物質包括豆芽汁、玉米粉、土壤浸液、麩皮、牛奶、血清、椰子汁等。天然培養基成本較低,除在實驗室經常使用外,也適于用來進行工業上大規模的微生物發酵生產。固體培養基培養基組合培養基合成培養基是根據天然培養基的成分,用化學物質模擬合成、人工設計而配制的培養基。例如,高氏1號培養基和查氏培養基等。合成培養基有一定的配方,配制合成培養基時重復性強,但與天然培養基相比其成本較高,微生物在其中生長速度較慢,一般適于在實驗室用來進行有關微生物營養需求、代謝、分類鑒定、生物量測定、菌種選育及遺傳分析等方面的研究工作。[2]培養基半組合培養基指一類主要以化學試劑配制,同時還加有某種或某些天然成分的培養基。例如,馬鈴薯蔗糖培養基。培養基物理分類編輯語音培養基液體培養基80%~90%是水,其中配有可溶性的或不溶性的營養成分的培養基。培養基固體培養基一類配制成的固體狀態的基質。根據性質又分為固化培養基、非可逆性固化培養基、天然固態培養基、濾膜。無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家要求無細菌噬菌體污染。徐匯區常規臨床微生物檢驗培養基認真負責
對培養基一般采取高壓蒸汽滅菌,一般培養基用,℃條件下維持15-30min可達到滅菌目的。在高壓蒸汽滅菌過程中,長時間高溫會使某些不耐熱物質遭到破壞,如使糖類物質形成氨基糖、焦糖,因此含糖培養基常在,℃15-30分鐘進行滅菌,某些對糖類要求較高的培養基,可先將糖進行過濾除菌或間歇滅菌,再與其他已滅菌的成分混合;長時間高溫還會引起磷酸鹽、碳酸鹽與某些陽離子(特別是鈣、鎂、鐵離子)結合形成難溶性復合物而產生沉淀,因此,在配制用于觀察和定量測定微生物生長狀況的合成培養基時,常需在培養基中加入少量螯合劑,避免培養基中產生沉淀,常用的螯合劑為乙二胺四乙酸(EDTA)。還可以將含鈣、鎂、鐵等離子的成分與磷酸鹽、碳酸鹽分別進行滅菌,然后再混合,避免形成沉淀;高壓蒸汽滅菌后,培養基pH會發生改變(一般使pH降低),可根據所培養微生物的要求,在培養基滅菌前后加以調整。在配制培養基過程中,泡沫的存在對滅菌處理極不利,因為泡沫中的空氣形成隔熱層,使泡沫中微生物難以被殺死。因而有時需要在培養基中加入消泡沫劑以減少泡沫的產生,或適當提高滅菌溫度。金山區質量臨床微生物檢驗培養基服務保障取材過程應嚴格按照操作規程執行,制備出的血清要經過嚴格的質量鑒定。
血清還含有一些微量元素和離子,他們在代謝***中起重要作用,如SeO3、硒等。血清培養基主要問題1.血清的成份可能有幾百種之多,對其準確的成份、含量及其作用機制不清楚,尤其是對其中一些多肽類生長因子、***和脂類等尚未充分認識,這給研究工作帶來許多困難。2.血清都是批量生產,各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難,從而使實驗的標準化和連續性受到限制。3.對大多數細胞,在體內狀態,血清不是它們接觸的生理學液體,只是在損傷愈合以及血液凝固過程中才接觸血清,因此使用血清有可能改變某種細胞在體內的正常狀態,血清可能促進某些細胞的生長(成纖維細胞)同時***另一類細胞生長(表皮細胞)。4.血清含一些對細胞產生毒性的物質,如多胺氧化酶,能與來自高度繁殖細胞的多胺反應(如精胺、亞精胺)形成有細胞毒性作用的聚精胺。補體、抗體、細菌***等都會影響細胞生長,甚至造成細胞死亡。5.動物個體不同,血清產地、批號不同,每批質量差異甚大,其成分不能保持一致。6.取材中可能帶入支原體、病毒,對細胞產生潛在影響,可能導致實驗失敗或實驗結果不可靠性。7.大規模生產中,血清來源越來越困難。
調整pH值到6。分裝,滅菌,備用。該培養基用于培養和保存靈芝、平菇、香菇等食用菌菌種。***的培養基在植物組織培養時,通過調節IAA和CTK的比值能影響愈傷組織分化出根或芽。CTK/IAA高時,愈傷組織分化芽。CTK/IAA低時,分化根;CTK/IAA比例適中維持愈傷組織不分化。愈傷組織誘導培養基制備以MS培養基母液為基礎,向潔凈鋁鍋中順序加入大量元素20×母液100mL,微量元素100×母液20mL,鐵鹽100×母液20mL,維生素100×母液20mL,肌醇200×母液10mL,甘氨酸200×母液10mL,配制得MS培養基后,再加入·L-1的BA8mL,·L-1的NAA8mL。然后加入實際配制培養基體積約2/3-3/4的蒸餾水,加入40g蔗糖后攪拌使其溶化,用·L-1的NaOH和mol·L-1的HCl調整pH值至。加入14g瓊脂,將鋁鍋置于電爐上,攪拌加熱使瓊脂完全溶化,然后用蒸餾水定容至終體積2L,繼續加熱幾分鐘使之混合均勻后分裝于三角瓶中。******葉片愈傷組織誘導取一無菌培養皿,用解剖刀切取1-2片無菌苗葉片置于無菌培養皿中,并用解剖刀將葉片切成2mm2左右的小片,然后將其接種于準備好的培養基上,每瓶接種5小片,一共接種6瓶。接種后的三角平置于24條件下黑暗培養1周。證明所用牛血清中不含對所生產疫苗病毒的***物。
應重新制備。待大部分固體成分溶化后,再用較小火力使所有成分完全溶化。迄至煮沸。如為瓊脂培養基,應先用一部分水將瓊脂溶化,用另一部分水溶化其它成分,然后將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中,因蒸發而丟失的水分,**后必須加以補足。培養基pH的初步調整培養基各成分完全溶解后,應進行pH的初步調正,因培養基在加熱消毒過程中、pH會有所變化,例如,牛肉浸液約可降低。而腸浸液pH卻會有***的升高。因此,對這個步驟,操作者應隨時注意探索經驗、以期能掌握培養基的**終pH,保證培養基的質量。pH調正后,還應將培養基煮沸數分鐘,以利培養基沉淀物的析出。培養基注意事項編輯語音培養基在使用前通過高壓或過濾滅菌。防止污染應該注意以下事項:確認工作細胞庫是否被污染,確認毒種工作種子批是否被污染,確認所用培養基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用細菌、***及支原體無菌試驗來確認并排除。同時要對無菌試驗培養基的靈敏度進行驗證。實際生產中,可以從配制好的培養液中取少量加入營養瓊脂于恒溫培養箱內培養,48小時即可觀察有無污染。其它:高壓滅菌設備、過濾除菌設備均應進行驗證,確保滅菌和除菌效果。血清的質量標準血清質量高低取決于兩方面因素:一是取材對象,二是取材過程。楊浦區現代臨床微生物檢驗培養基互惠互利
血清要通過濾膜過濾除菌,保證無菌。徐匯區常規臨床微生物檢驗培養基認真負責
培養基半固體培養基指在液體培養基中加入少量的凝固劑而配制成的半固體狀態的培養基。培養基脫水培養基又稱預制干燥培養基,指含有除水分外的一切成分的商品培養基。培養基微生物分類編輯語音選擇性培養基:一類根據某微生物的特殊營養要求或其對某化學、物理因素的抗性而設計的培養基,具有使混合菌樣中的劣勢菌變成優勢菌的功能,***用于菌種篩選等領域。鑒別培養基:一類在成分中加有能與目的菌的無色代謝產物發生顯色反應的指示劑,從而達到只須用肉眼辨別顏色就能方便的從近似菌落中找出目的菌菌落的培養基。例如,伊紅美藍乳糖培養基(EMB)。培養基常見培養基編輯語音細菌培養基牛肉膏瓊脂培養基牛肉膏,蛋白胨,氯化鈉,瓊脂,水100ml在燒杯內加水100ml,放入牛肉膏、蛋白胨和氯化鈉,用蠟筆在燒杯外作上記號后,放在火上加熱。待燒杯內各組分溶解后,加入瓊脂,不斷攪拌以免粘底。等瓊脂完全溶解后補足失水,用10%鹽酸或10%的氫氧化鈉調整pH值到,分裝在各個試管里,加棉花塞,用高壓蒸汽滅菌:、121攝氏度維持15-30分鐘。牛心培養基細菌培養基取新鮮牛心(除去脂肪和血管)250克,用刀細細剁成肉末后,加入500毫升蒸餾水和5克蛋白胨。在燒杯上做好記號,煮沸。徐匯區常規臨床微生物檢驗培養基認真負責
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