物質的吸收光譜:
如果在光源和棱鏡之間放上某種物質的溶液,此時在屏上所顯示的光譜已不再是光源的光譜,它出現了幾條暗線,即光源發射光譜中某些波長的光因溶液吸收而消失,這種被溶液吸收后的光譜稱為該溶液的吸收光譜。
不同物質的吸收光譜是不同的.因此根據吸收光譜,可以鑒別溶液中所含的物質。
當光線通過某種物質的溶液時透過的光的強度減弱,因為有一部分光在溶液的表面反射或分散,一部分光被組成此溶液的物質所吸收只有一部分光可透過溶液。
入射光= 反射光 + 分散光 + 吸收光 + 透過光。
如果我們用蒸餾水(或組成此溶液的溶劑)作為"空白"去校正反射,分散等因素造成的入射光的損失則:入射光 = 吸收光 十 透過光。
分光光度計是利用分光光度法對物質進行定量定性分析的儀器,常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。江蘇全光譜波長超微量分光光度計
Micro Drop蛋白質檢測功能:
Protein Pierce 660nm檢測方式:
Protein Pierce 660nm主要用來定量檢測那些含有還原劑或者去污劑的總蛋白濃度,使用的的試劑/樣品體積比例為15:1。當使用基座檢測時,推薦使用4μl樣品和60μl試劑。
按照試劑盒生產廠家的說明來準備標準品和和構建標準曲線。確保在所有檢測過程中,每個樣品的處理時間及環境溫度一致。可以從試劑盒生產廠家購買用于構建標準曲線的蛋白標準品(BSA)。
當使用4μl樣品和60μl試劑時,Pierce 660nm可以檢測的濃度范圍為50ug/ml到125ug/ml。
甘肅高靈敏度超微量分光光度計探針檢測用來測量待測物質對可見光(400~760nm)的吸光度并進行定量分析的儀器,稱為可見分光光度計。
Micro Drop微陣列檢測功能:
通過這個功能可以篩選有效的熒光標記雜交探針用于芯片試驗,這樣避免潛在的不好的探針,可以提高試驗效率。Micro Drop可以檢測熒光染料的吸收光強度,比較低可以檢測0.2pmol/μl的熒光染料。軟件可以自動應用相應的波長檢測樣品的吸光值。
1. 在功能鍵中選擇微陣列。
2. 輸入樣品編號。
3. 選擇檢測樣品的類型,默認的設定為DNA,消光因子為50。
4. 選擇濃度單位,默認的單位是μg/ml.
5. 使用染料1或者染料2后面的下拉框來選擇染料,默認的染料設定:染料1(Cy3),染料2(Cy5),如
果*標記了一個染料,在染料2類型上選擇無。
6. 可以選擇分析校正,默認的校準波長為340nm,也可以重新輸入一個校準波長。
7. 選擇疊加顯示可以在采樣曲線框中顯示多個檢測樣品的實驗結果。
8. 用干凈的無塵紙擦干凈上下基座,使用合適的液體建立空白對照,空白對照液體能夠溶解目標溶液。空
白對照液體的pH值和離子濃度應和檢測樣品一樣。
Micro Drop蛋白質檢測功能:
Protein BCA檢測類型:
BCA是一種通過比色來檢測非純蛋白的濃度的方法,它通常用于稀釋的蛋白濃度檢測,以及那些在紫外區域含有吸收光雜質的蛋白的濃度檢測。BCA法需要在蛋白定量前構建一個標準曲線。
BCA法是檢測Cu+1離子的方法,在堿性環境下,Cu+2離子會被蛋白還原為Cu+1離子。兩個聯喹啉二羧酸BCA分子和一個Cu+1離子會形成紫色的螯合物。在有蛋白存在的情況下,以750nm波長的吸光值為基線,Cu-BCA形成的螯合物在562nm處有比較大吸光值。
常規檢測使用試劑/蛋白樣品的體積比為20:1,檢測濃度范圍為0.20mg/ml到8.0mg/ml(BSA)。當使用基座檢測時,推薦使用4μl樣品和80μlBCA試劑。
微量檢測使用試劑/樣品的體積比為1:1,可以檢測蛋白濃度范圍從0.01mg/ml至0.20mg/ml。要準備足夠的樣品來做基座檢測,建議使用10μl樣品和10μlBCA試劑(使用PCR管)。
按照試劑盒生產廠家的說明來準備標準品和構建標準曲線。確保在所有檢測過程中,每個樣品的處理時間及環境溫度一致。
MicroDrop基座模式下光程1.0、0.2、0.1和0.05mm自動調整。
分光光度計采用一個可以產生多個波長的光源,通過系列分光裝置,從而產生特定波長的光源,光線透過測試的樣品后,部分光線被吸收,計算樣品的吸光值,從而轉化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
單色光輻射穿過被測物質溶液時,被該物質吸收的量與該物質的濃度和液層的厚度(光路長度)成正比,其關系如下式:
A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc
式中 :A 為吸光度;
I0為入射的單色光強度;
I 為透射的單色光強度;
T 為物質的透射率;
k 為摩爾吸收系數;
L 為被分析物質的光程,即比色皿的邊長;
c 為物質的濃度;
物質對光的選擇性吸收波長,以及相應的吸收系數是該物質的物理常數。當已知某純物質在一定條件下的吸收系數后可用同樣條件將該供試品配成溶液,測定其吸收度,即可由上式計算出供試品中該物質的含量。在可見光區,除某些物質對光有吸收外,很多物質本身并沒有吸收但可在一定條件下加入顯色試劑或經過處理使其顯色后再測定,故又稱比色分析。由于顯色時影響呈色深淺的因素較多,且常使用單色光純度較差的儀器,故測定時應用標準品或對照品同時操作。
使用分光棱鏡或者光柵產生光譜,并利用其中特定的某個或某段光譜線強度來進行分析的儀器叫做分光光度計。貴州性價比高超微量分光光度計樣品檢測
蛋白質在280nm波長處有較大吸光值。江蘇全光譜波長超微量分光光度計
包括波長范圍為400~760 nm的可見光區和波長范圍為200~400 nm的紫外光區。不同的光源都有其特有的發射光譜,因此可采用不同的發光體作為儀器的光源。
鎢燈的發射光譜:鎢燈光源所發出的400~760nm波長的光譜光通過三棱鏡折射后,可得到由紅橙,黃綠,藍靛,紫組成的連續色譜;該色譜可作為可見光分光光度計的光源。
氫燈(或氘燈)的發射光譜:氫燈能發出185~400 nm波長的光譜可作為紫外光光度計的光源。
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江蘇全光譜波長超微量分光光度計
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