如何測定的吸光度范圍?
通常,酶標儀的吸光度測定范圍在0-2.5之間即可以滿足ELISA的測定要求。早期的酶標儀可測定的吸光度一般在0-2.5之間,但現在基本上都做了拓寬,可達到3.5以上,并且能保持很好的精密度與線性。
對于酶標儀的吸光度范圍不必去刻意追求大的吸光度范圍,主要要看在一定的吸光度范圍內的線性和精密度如何。
酶標儀的光學系統采用的是垂直光路多通道(通常為8或12通道,亦有單通道)檢測,一般為硅光管或光導纖維,除測定通道外,有的酶標儀還有一個參比通道,每次測定可進行自我校準。酶標儀的光學系統功能如何,均可通過酶標儀測定的吸光度范圍、線性度、精密度和準確度等體現出來。光學系統好的話,則上述指標也應較佳。測定的精密度與測定通道之間的均一性有直接關系。單通道可避免因通道不同所致的差異。
波長100-400nm稱為紫外光,400-780nm之間的光稱為可見光,大于780nm稱為紅外光。四川多功能酶標儀高清觸屏
選擇酶標儀的檢測波長:
405nm:ELISA檢測,底物是PNPP;
405-420:ELISA檢測,底物是ABTS;
450nm:
1. 科研應用:
細胞增殖檢測CCK-8;ELISA檢測,底物是TMB;
ELISA檢測,底物是OPD(pH5.0,OPD比較**長450;pH1.0,OPD比較**長492);
2. 醫療應用:
丙肝、乙肝檢測;HIV檢測;甲胎蛋白的測定AFP(肺免疫學檢測);CA15-3(乳腺的測定);單純皰病毒的檢測等等。
3. 農業檢測:
動物疫病檢測,禽類疫病檢測;
4. 食品與環境安全:
檢測,獸藥殘留檢測,添加劑檢測,檢測。
490nm:細胞增殖檢測MTT;
540nm:一氧化氮(NO)檢測;
562nm:蛋白質濃度測定(BCA);
595nm:蛋白質濃度測定(考馬斯亮藍染色);
河南操作簡便酶標儀酶聯免疫光吸收的檢測技術成熟,成本低,操作簡單。
國內多家機構,如衛生部臨床檢驗中心和計劃生育系統等多次強調酶標儀的重要性,并要求酶聯免疫檢測試劑應使用酶標儀判讀,酶免試劑的質控也應使用酶標儀,并提供酶標儀測定的原始數據,而各廠家的試劑盒說明書沒有是讓用目測的。同時酶免檢測的項目往往是一些實質性的和病變(如:肝炎、、優生優育等),判讀更要求嚴謹,由誤診引起的糾紛很難處理。另外,住院手術病人術前的丙肝、艾滋等EIA試劑檢測是避免因輸血引起引發的醫療事故糾紛的必要手段,正逐漸被許多單位所采用。
上海寶予德科學儀器有限公司為大家介紹:光通過被檢測物,前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量,特定波長下,同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關系。
檢測單位用OD值表示, OD是optical density(光密度)的縮寫,表示被檢測物吸收掉的光密度, OD=log(1/trans),其中trans為檢測物的透光值。根據Bouger-amberT-beer法則,OD值與光強度成下述關系:
E=OD=log(lo/Ι) 其中E表示被吸收的光密度, Ιo 為在檢測物之前的光強度,Ι為從被檢測物出來的光強度。
酶標儀的檢測速度是指其完成比色測定所需要的時間。
根據不同的檢測模式和樣品類型,酶標儀需要選配不同波長的濾光片。一般來說,激發濾光片和發射濾光片應該匹配樣品的激發和發射譜,并且兩者之間應該有足夠的隔離以避免信號干擾。參考濾光片應該選擇與激發或發射波長相近但不重疊的波長,并且與樣品無關。常見的酶標儀濾光片波長有:
光吸收模式:340 nm、405 nm、450 nm、492 nm、620 nm等;
熒光模式:340/460 nm、360/460 nm、485/535 nm、490/520 nm等;
化學發光模式:400 nm、410 nm、430 nm等;
時間分辨熒光模式:337/620 nm、355/665 nm等;
熒光偏振模式:485/535 nm等。
濾光片酶標儀也有優勢,例如價格較為便宜,檢測靈敏度高,帶寬的可選擇性。河南操作簡便酶標儀酶聯免疫
濾光片作用是根據不同的波長選擇性地透過或反射光線,從而實現對樣品信號的分離和增強。四川多功能酶標儀高清觸屏
酶標儀的震板功能是指酶標儀在對ELISA板孔進行比色測定前對其進行振蕩混勻,使板孔內顏色均一。目前市場上常見的酶標儀均有震板功能,所不同的是震板方式,有的可按上下、左右或旋轉等方式及振蕩幅度等任意調節;有的則較為固定。使用有震板功能的酶標儀,在進行ELISA測定顯色反應完成加入終止劑后,可不必振蕩混勻,直接放人酶標儀上測定即可。溫育功能是指酶標儀本身能按要求自動精確地控制儀器內部的溫度,使得ELISA測定中微孔板條的溫育過程可在儀器內部完成,而無需再外配溫箱。目前,只有少部分酶標儀具有此種功能,溫育功能只是酶標儀的一個附加功能,是否具有并不能說明酶標儀檔次的高低及儀器的優劣。作為實驗室是否選擇,則可根據自己實驗室的條件及需要來決定。四川多功能酶標儀高清觸屏
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