濾光片是酶標儀中重要的光學元件,它的作用是根據不同的波長選擇性地透過或反射光線,從而實現對樣品信號的分離和增強。濾光片可以分為干涉濾光片和吸收濾光片兩種,前者是利用多層薄膜之間的干涉效應來實現波長選擇,后者是利用染料或金屬等材料對特定波長的吸收來實現波長選擇。干涉濾光片具有透過率高、帶寬窄、溫度穩定性好等優點,是目前酶標儀中常用的濾光片類型。
酶標儀中常用的濾光片有三種:激發濾光片、發射濾光片和參考濾光片。激發濾光片位于光源和樣品之間,用于選擇合適的激發波長來激發樣品發出熒光或化學發光。發射濾光片位于樣品和探測器之間,用于選擇合適的發射波長來檢測樣品發出的熒光或化學發光。參考濾光片位于參考探測器前面,用于消除環境因素對檢測結果的影響,提高檢測精度。
熒光酶標儀是用來進行熒光的檢測。遼寧檢測快速酶標儀檢驗
酶標儀與分光光度計區別:
(2)光路的方向:分光光度計是水平光路,而酶標儀則是垂直光路。由于酶標板盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的,光線只能垂直穿過,因此酶標儀的光束都是垂直通過待測溶液和微孔板的,光束既可是從上到下,也可以是從下到上穿過比色液。垂直光的特點是標本吸光度受液體濃縮或稀釋的影響小,不足之處是受被測樣本液面是否水平、酶標板透光性、孔底是否平整等的影響較大。
(3)光路的長度:由于光密度(OD值)與吸光系數, 待測組分的濃度以及光路長度成正比關系。分光光度計采用的比色杯的寬度通常是25px,所以光路長度固定為25px。因此不同儀器,不同批次測量的數據具有同樣的可比性。而酶標儀采用的是垂直光路, 所以光路的長度應該是液體液面的高度,所以測得的值受到樣品的體積的影響。
海南性能穩定酶標儀檢驗酶標儀是實驗室常用的一種儀器,一般可以按照濾光方式的不同和功能的不同進行劃分。
酶標儀(MicroplateReader)是對酶聯免疫檢測(EIA)實驗結果進行讀取和分析的專業儀器。酶聯免疫反應通過偶聯在抗原或抗體上的酶催化顯色底物進行的,反應結果以顏色顯示,通過顯色的深淺即吸光度值的大小就可以判斷標本中待測抗體或抗原的濃度。酶標儀***地應用在臨床檢驗、生物學研究、農業科學、食品和環境科學中,由于大量的酶聯免疫檢測試劑盒的應用,使得酶標儀在生殖保健領域中應用越來越***,同時促進了生殖健康技術水平提高。
選擇酶標儀的檢測波長:
405nm:ELISA檢測,底物是PNPP;
405-420:ELISA檢測,底物是ABTS;
450nm:
1. 科研應用:
細胞增殖檢測CCK-8;ELISA檢測,底物是TMB;
ELISA檢測,底物是OPD(pH5.0,OPD比較**長450;pH1.0,OPD比較**長492);
2. 醫療應用:
丙肝、乙肝檢測;HIV檢測;甲胎蛋白的測定AFP(肺免疫學檢測);CA15-3(乳腺的測定);單純皰病毒的檢測等等。
3. 農業檢測:
動物疫病檢測,禽類疫病檢測;
4. 食品與環境安全:
檢測,獸藥殘留檢測,添加劑檢測,檢測。
490nm:細胞增殖檢測MTT;
540nm:一氧化氮(NO)檢測;
562nm:蛋白質濃度測定(BCA);
595nm:蛋白質濃度測定(考馬斯亮藍染色);
酶標儀可以分為光吸收酶標儀,熒光酶標儀,化學發光酶標儀和多功能的酶標儀。
根據不同的檢測模式和樣品類型,酶標儀需要選配不同波長的濾光片。一般來說,激發濾光片和發射濾光片應該匹配樣品的激發和發射譜,并且兩者之間應該有足夠的隔離以避免信號干擾。參考濾光片應該選擇與激發或發射波長相近但不重疊的波長,并且與樣品無關。常見的酶標儀濾光片波長有:
光吸收模式:340 nm、405 nm、450 nm、492 nm、620 nm等;
熒光模式:340/460 nm、360/460 nm、485/535 nm、490/520 nm等;
化學發光模式:400 nm、410 nm、430 nm等;
時間分辨熒光模式:337/620 nm、355/665 nm等;
熒光偏振模式:485/535 nm等。
寶予德K3 Plus酶標儀為8通道垂直光路光密度檢測儀,其設計目的是執行標準的光度測量。上海雙檢測模式酶標儀酶聯免疫
酶標儀常用波長為:405nm,450nm,490nm與630nm。遼寧檢測快速酶標儀檢驗
酶標儀在用單波長測定吸光度時,除受到測定干擾(樣本的濁度、干擾色等)和電路干擾(包括噪音、漂移、電壓等)等因素外,受液體表面張力的影響也很大。在檢測過程中,由于液體表面張力的作用,液體的表面不是一個平面,而是形成一個凹面,從側面看似凹透鏡,這樣不可避免會影響光路的正常通過。由于凹液面的影響,光線在通過液體時,除正常被液體吸收一部分外,尚有部分被折射和反射(如光線通過凹透鏡那樣),影響吸光度的檢測。而酶標儀使用的又是通過光導纖維傳播的點光源,如果每次能在同一部位檢測,吸光度的重復性將得到保證,但由于機械運動等造成的誤差,不可能保證每孔都在相同部位被檢測,因此造成了孔與孔之間有一定的差異。遼寧檢測快速酶標儀檢驗
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