超微量分光光度計主要是用來快速檢測一些樣品,比如蛋白、核酸等,幾乎每一個分析實驗室都離不開分光光度計,那么,超微量分光光度計怎么使用呢?***小編就Micro Drop為例,給大家介紹一下超微量分光光度計使用方法。
在此之前,我們先來了解一下超微量分光光度計的原理,微量分光光度計是利用光源通過光片調整光坡長,射入樣品液體中,再射入光電檢測器將光能轉換成電訊號。由樣本及空白水樣間所吸收之光能量差,與標準液之能量吸收值相比較,便可定樣本中待測物濃度。Micro Drop為一款全光譜波長超微量分光光度計,適用于更寬濃度范圍的樣品檢測,操作簡便,即擦即測。
蛋白質在280nm波長處有較大吸光值。上海雙檢測模式超微量分光光度計探針檢測
Micro Drop蛋白質檢測功能:
Protein Bradford檢測方式:
Bradford是常用的蛋白定量檢測的方法。它通常用于濃度比較低的蛋白的濃度檢測。與其他比色法一樣,Bradford法檢測蛋白濃度時必須構建一個標準曲線。
Bradford法是根據蛋白質在酸性溶液中,能夠使考馬斯亮藍結合,使得染料的比較大吸收峰值變更為595nm來檢測蛋白濃度。檢測蛋白-染料復合物在595nm處的吸光值,并在750nm處做基線校正,計算得出蛋白的濃度。
常規檢測使用試劑/蛋白樣品的體積比為50:1,檢測濃度范圍為0.10mg/ml到8.0mg/ml(BSA),比較好線性濃度范圍在0.01-1mg/ml。當使用基座檢測時,推薦使用4μl樣品和200μl Bradford試劑。
微量檢測使用試劑/樣品的體積比為1:1,可以檢測蛋白濃度范圍從15ug/ml至125ug/ml。要準備足夠的樣品來做基座檢測,建議使用10μl樣品和10μlBCA試劑(使用PCR管)。
按照試劑盒生產廠家的說明來準備標準品和和構建標準曲線。確保在所有檢測過程中,每個樣品的處理時間及環境溫度一致。
貴州雙檢測模式超微量分光光度計核酸檢測超微量分光光度計已成為現代分子生物實驗室常規儀器。
Micro Drop為一款全波長(185~910nm)超微量紫外可見分光光度計,不僅提供了便于測量小劑量樣本的基座模式,也可以使用傳統的比色皿來進行樣本檢測。
基座模式下,本產品可以檢測0.5-2μl的樣本,而且檢測具有非常高的準確性和重復性。使用基座模式檢測樣本時,樣本保留系統應用了表面張力來把樣本保留在兩根檢測光纖中間,這使得儀器可以檢測較高濃度的樣本而不用稀釋,測量濃度范圍可達普通分光光度計檢測濃度范圍的200倍,且可實時調控光纖之間的液柱高度,以獲得更準確的檢測數據。相對于傳統的比色皿檢測方法,基座模式免去了復雜的比色皿清洗過程,只需使用無塵紙擦拭,清理簡便。另外,對于濃度低、易揮發或者表面張力比較低不易形成液柱的樣品,可以使用比色皿進行測量。
開機后,按鈕亮起并持續保持光亮,在檢測過程中,按鈕指示燈會閃爍表示儀器正在運行中。本產品無需預熱,即可直接進行測量,操作簡單,快捷,且軟件可以直接給出濃度值。此外,本產品體積小,質量輕,便于攜帶。
Micro Drop細胞檢測功能:
細胞檢測是使用分光光度計檢測光透過細胞懸液的散射光,得出對應吸光值。對于Micro Drop而言,基座檢測和比色皿檢測之間比較大的不同是光程不一樣,光譜圖顯示的是從250nm到700nm范圍內的光譜檢測結果。
樣本均一性:在檢測前要確保樣品的均一性,使用基座檢測前要把樣品混合均一再加到基座上檢測,使用比色皿檢測時可以使用攪拌功能。
檢測范圍:由于采用了比較短的檢測光程,Micro Drop可以檢測比較高濃度的細胞懸液。由于可以顯示較**段的光譜。比較稀的樣品可以在較低的波長下檢測,比如說可以在400nm處檢測。用戶還可以使用比色皿來檢測比較稀的樣品。
檢測基座的消毒:如果需要消毒,請使用消毒液,如可以使用0.5%的次氯酸鈉來清潔基座,以保證基座上沒有生物活性物質殘留。
A320nm 或A340nm——是基線校準波長,為檢測溶液樣品的濁度和其他干擾因子。
超微量分光光度計的應用:
(一)核酸的定量:
核酸的定量是超微量分光光度計使用頻率比較高的功能。可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈DNA、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的比較高吸收峰的吸收波長260nm。每種核酸的分子構成不一,因此其換算系數不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對應消光因子。如:1OD的吸光值分別相當于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經過上述系數的換算,從而得出相應的樣品濃度。除了核酸濃度,分光光度計顯示幾個非常重要的比值表示樣品的純度,如A260/A280的比值,用于評估樣品的純度,因為蛋白的吸收峰是280nm。純凈的樣品,比值大于1.8(DNA)或者2.0(RNA)。如果比值低于1.8或者2.0,表示存在蛋白質或者酚類物質的影響。A230表示樣品中存在一些污染物,如碳水化合物,多肽,苯酚等,較純凈的核酸A260/A230的比值大于2.0。
每種核酸的分子構成不一,因此其換算系數不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對應消光因子。天津高靈敏度超微量分光光度計探針檢測
Micro Drop超微量每次測量完畢后,用蒸餾水清潔上下光纖端面。上海雙檢測模式超微量分光光度計探針檢測
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