外泌體的表征分析：動(dòng)態(tài)光散射：使用Anton-PaarLightsizer500粒子分析儀測(cè)定外泌體制劑中的粒度分布。動(dòng)態(tài)光散射測(cè)量由于溶液中粒子的布朗運(yùn)動(dòng)引起的散射光強(qiáng)度的動(dòng)態(tài)波動(dòng)，（685nm的激光，檢測(cè)角度為15、90、175度）；較小的粒子比較大的粒子移動(dòng)得更快。確定顆粒大小時(shí)，通常使用三種分布類型：(1)數(shù)量分布，報(bào)告不同大小“箱”中的顆粒數(shù)量；(2)體積分布報(bào)告不同尺寸類別的顆粒總體積；(3)強(qiáng)度分布，報(bào)告不同大小顆粒散射的光。也可以使用高分辨率納米粒徑分析儀NanocoulterⅠ來(lái)分析樣品中每種大小的囊泡的實(shí)際數(shù)量、濃度及粒子動(dòng)態(tài)、Zeta電位等。為了進(jìn)行分析，將先前儲(chǔ)存在-20°C的75μl等分試樣的外泌體制劑用925μlPBS稀釋（得到1ml）并轉(zhuǎn)移到一次性比色皿中用于DLS測(cè)量。外泌體可通過(guò)血液或其他體液傳播，從而在遠(yuǎn)離原發(fā)灶的部位誘導(dǎo)細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。合肥組織提取外泌體分離蛋白檢測(cè)

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。一是免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡(jiǎn)單、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會(huì)影響外泌體生物活性，不便進(jìn)行下一步的實(shí)驗(yàn)。二是PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9《ScientificReports》雜志發(fā)表了該方法較新數(shù)據(jù)，表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體。合肥尿液外泌體報(bào)價(jià)表外泌體與神經(jīng)系統(tǒng)的關(guān)系復(fù)雜，通過(guò)在神經(jīng)元間的轉(zhuǎn)移，參與多種神經(jīng)疾病的發(fā)生和病理機(jī)制的形成。

差速離心法分離外泌體的實(shí)驗(yàn)原理：外泌體是一種小的(40-100nm)細(xì)胞外膜囊泡，目前進(jìn)行外泌體分離的普遍方法是差速離心法。應(yīng)用差速離心法和粒徑分析等是細(xì)胞外囊泡(EV)研究的重要步驟。已知細(xì)胞會(huì)分泌許多膜囊泡，這些囊泡的大小、分子含量及其形成機(jī)制各不相同具體取決于細(xì)胞的類型和當(dāng)前狀態(tài)。通常可以辨別出三個(gè)主要的EV群體：凋亡小體、脫落的囊泡和外泌體.凋亡小體是已知較大的囊泡，直徑為800-5000nm，由凋亡后細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)和質(zhì)膜成分組成。脫落的囊泡和外泌體由非凋亡細(xì)胞釋放。脫落的囊泡，也稱為“胞外體”或有時(shí)稱為“微泡”，是由質(zhì)膜起泡產(chǎn)生的，一般的粒徑尺寸范圍為(50–1000nm)。

差速離心法分離外泌體的實(shí)驗(yàn)原理：離心管內(nèi)粒子的速度，由三種力（離心力、阿基米德浮力和斯托克斯粘性阻力）的平衡決定，如：其中g(shù)eff為離心力（加速度），R為旋轉(zhuǎn)半徑，即粒子距旋轉(zhuǎn)軸的距離，ω為旋轉(zhuǎn)角頻率，d為粒子直徑，ρ為質(zhì)量粒子的密度和ρsolv和η分別是介質(zhì)的密度和粘度。在固定的離心條件（轉(zhuǎn)速和介質(zhì)成分）下，粒子速度完全由粒子的形態(tài)和密度決定。密度高于介質(zhì)密度的粒子沿離心力“向下”運(yùn)動(dòng)，而比介質(zhì)輕的粒子沿與離心力相反的方向“上浮”。對(duì)于相似的密度，較大的粒子遷移得更快。因此，在生物學(xué)中，離心主要用于按大小（差速和速率區(qū)帶離心）或按密度（等密度離心）分離不同的物體。在這項(xiàng)研究中，我們專注于使用差速離心按大小進(jìn)行顆粒分級(jí)。優(yōu)化外泌體分離方法可以提高分離效率和分離精度。

人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體，包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血小板、平滑肌細(xì)胞等。當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時(shí)，外泌體可通過(guò)其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來(lái)調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過(guò)以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合，進(jìn)而靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，從而打開(kāi)細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。有報(bào)道稱一些外泌體膜上蛋白在其來(lái)源細(xì)胞膜上未能檢測(cè)出。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。外泌體分離的方法會(huì)影響外泌體樣品的質(zhì)量和數(shù)量。寧波血液RNA外泌體

部分外泌體分離方法可能存在對(duì)外泌體結(jié)構(gòu)和元素的影響。合肥組織提取外泌體分離蛋白檢測(cè)

分離外泌體的方法之微流控分離：基于微流體的外泌體分離可以包括用于外泌體捕獲的免疫親和方法，納米多孔膜篩分方法或微柱上的納米線用于外泌體捕獲。所有三個(gè)系統(tǒng)都需要具有粘彈性分析和電操作的芯片才能進(jìn)行外泌體分離過(guò)程。外泌體的特異性很高，采用基于微流控芯片的免疫親和捕獲方法。尺寸范圍在40-100nm之間的外泌體被這種微流體芯片特異性地捕獲，在外泌體分離和定量方面的益處。篩分方法可用于通過(guò)壓力或通過(guò)電泳從全血中過(guò)濾外泌體，壓力的利用使分離時(shí)間更短，電場(chǎng)導(dǎo)致高外泌體純度。特異性、可重復(fù)性、低分離時(shí)間和更低的分離成本是基于微流體的外泌體分離的一些優(yōu)點(diǎn)。合肥組織提取外泌體分離蛋白檢測(cè)

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