什么是DNA提取？DNA提取是DNA的分離和純化過程。DNA可以從血液、冷凍組織樣本或石蠟組織塊中分離出來。DNA提取的三個(gè)步驟是細(xì)胞裂解、DNA分離和沉淀。在細(xì)胞裂解過程中，細(xì)胞膜和細(xì)胞核膜等細(xì)胞膜屏障會(huì)破裂，從而暴露DNA。下一步是從樣品中去除膜脂。較后，DNA的沉淀涉及通過蛋白酶去除DNA相關(guān)蛋白和通過RNase去除RNA。骨組織RNA提取的注意事項(xiàng)：不合適的儲(chǔ)存于低溫（4℃或者－20℃）會(huì)造成溶液沉淀，影響使用效果，因此運(yùn)輸和儲(chǔ)存均在室溫下（15℃－25℃）進(jìn)行。避免試劑長(zhǎng)時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、PH值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。DNA提取的不同方法可以用于不同類型的樣品和研究目的。成都外泌體RNA提取制造商

外泌體DNA提取過程：操作步驟：1.請(qǐng)自行準(zhǔn)備：無水乙醇、1.5mL離心管。2.取出洗滌液，按以下操作：a)洗滌液A：21mL加入9mL無水乙醇；42mL加入18mL無水乙醇，混勻。b)洗滌液B：9mL加入21mL無水乙醇；18mL加入42mL無水乙醇，混勻。c)配制好的洗滌液如出現(xiàn)沉淀，可在37℃溶解，搖勻后使用。3.取1.5mL離心管，加入200μL外泌體樣本，再加入200μL裂解液及20μL消化液，漩渦震蕩10秒，充分混勻，65℃水浴10分鐘。4.加入0.9mL無水乙醇，輕輕顛倒混勻，如有半透明懸浮物，不影響DNA的提取與后續(xù)實(shí)驗(yàn)。南京血液DNA提取純度高RNA提取需要使用酶或化學(xué)試劑來裂解細(xì)胞膜和核膜。

DNA提取的原則：1.保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性；2.核酸樣品中不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過高濃度的金屬離子；3.其他生物大分子如蛋白質(zhì)、多糖和脂類分子的污染應(yīng)降低到較低程度；4.其他核酸分子，如RNA，也應(yīng)盡量去除。DNA提取的樣品準(zhǔn)備：生物組織：一.較好新鮮組織，若不能馬上提取，應(yīng)貯存-70℃或液氮。二.液氮冷凍敲碎研磨。三.組織勻漿法。四.液氮?jiǎng)驖{法。培養(yǎng)細(xì)胞：懸浮生長(zhǎng)細(xì)胞：1500g離心，4℃10分種收集細(xì)胞。單層培養(yǎng)細(xì)胞：可用刮棒或胰酶消化后離心收集。血液樣品：血液樣品一.血液抗凝易用檸檬酸抗凝液（ACD）：檸檬酸0.48g；檸檬酸鈉1.32g；右旋葡萄糖1.47g加H2O至100ml，每6ml新鮮血液加1mlACD液零度保存數(shù)天，-70度長(zhǎng)期貯存。

磁珠法提取DNA提取方法的工作原理：磁珠法是通過裂解液裂解細(xì)胞組織樣本，從樣本中游離出來的核酸分子被特異的吸附到磁性顆粒表面，蛋白質(zhì)等雜質(zhì)不被吸附而留在溶液中。將攜帶核酸的磁珠移動(dòng)至不同的試劑槽內(nèi)，通過反復(fù)快速攪拌、混勻液體，經(jīng)過細(xì)胞裂解、核酸吸附、洗滌與洗脫等步驟，較終得到純凈的核酸。磁珠提取DNA原理：電荷的鹽離子的作用（如Na+），帶負(fù)電的磷酸基團(tuán)借由解離的鹽離子（如Na+）與羧基形成離子橋，使DNA被特異性吸附到羧基磁珠表面。當(dāng)PEG與鹽類被去除之后，加入水性分子，會(huì)快速充分水化DNA，解除其三者之間的離子相互作用，使得吸附到磁珠的DNA被純化出來。RNA提取可以使用不同的組織或細(xì)胞類型來比較RNA的表達(dá)。

microRNA提取方法及步驟：室溫放置5分鐘以充分分離核酸蛋白復(fù)合物。加入200μl氯仿，劇烈振蕩15秒。室溫放置2-3分鐘，13，000rpm離心10分鐘。小心取上清（約600μl）轉(zhuǎn)入到新的離心管，加入1.5倍體積的無水乙醇（必須是室溫的，通常900μl），渦旋混勻。此時(shí)可能出現(xiàn)沉淀,但是不影響提取過程,立即吹打混勻,不要離心，立刻接下步。將混合物(每次小于700μl，多可以分兩次加入)加入一個(gè)吸附柱RA中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm離心30-60秒，棄掉廢液。加700μlWashSolution1（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇!），12，000rpm離心30秒，棄掉廢液。加入500μlWashSolution2/3（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm離心30秒，棄掉廢液。加入500μlWashSolution2/3,重復(fù)一遍。DNA提取的過程中需要注意消毒和安全措施，以避免污染和傷害。快速DNA提取制造商

RNA提取可以用于分析RNA的序列和結(jié)構(gòu)。成都外泌體RNA提取制造商

DNA提取定量：分光光度法：測(cè)定DNA在A260的光吸收，計(jì)算濃度。雙鏈DNA：A260*稀釋倍數(shù)*50（ug/ml）單鏈DNA：A260*稀釋倍數(shù)*40（ug/ml）單鏈核苷酸DNA：A260*稀釋倍數(shù)*20（ug/ml）.瓊脂糖平板法：在含溴乙錠的瓊脂糖平板上滴1-5ul樣品DNA和已知濃度標(biāo)準(zhǔn)品，放置數(shù)小時(shí)后檢測(cè)。微型凝膠電泳：將樣品和標(biāo)準(zhǔn)品同時(shí)電泳，染色，比較熒光強(qiáng)度。DNA提取之貯存：短期儲(chǔ)存：4℃或-20℃存放于TE緩沖液中。長(zhǎng)期貯存：在70%乙醇，或在DNA溶液中加一滴氯仿，-70℃保存。成都外泌體RNA提取制造商

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