分離外泌體的方法之免疫親和相互作用：免疫親和法是利用外泌體表面蛋白（抗原）與其靶抗體或分離配體分子之間的免疫親和相互作用原理分離純外泌體的理想方法。它有助于根據其表面標志物分離特定類型的外泌體。基于微孔板的酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA）是免疫親和分離試劑盒的一個例子，用于根據外泌體表面標志物分離外泌體。Tetraspanin蛋白是這種分離方法的決定因素。抗CD9、抗CD63和抗CD81是免疫親和外泌體分離中使用的抗體的常見示例。免疫親和法可用于從結腸病細胞中分離外泌體，其效率高于超速離心和密度梯度分離。另外還有一種外泌體分離方法，該方法采用抗體包被的基于磁性顆粒的技術來分離外泌體。優(yōu)化外泌體分離方法可以用于解決外泌體復雜性掩蓋的問題。濟南外泌體哪家專業(yè)

外泌體的表征分析：動態(tài)光散射：使用Anton-PaarLightsizer500粒子分析儀測定外泌體制劑中的粒度分布。動態(tài)光散射測量由于溶液中粒子的布朗運動引起的散射光強度的動態(tài)波動，（685nm的激光，檢測角度為15、90、175度）；較小的粒子比較大的粒子移動得更快。確定顆粒大小時，通常使用三種分布類型：(1)數量分布，報告不同大小“箱”中的顆粒數量；(2)體積分布報告不同尺寸類別的顆粒總體積；(3)強度分布，報告不同大小顆粒散射的光。也可以使用高分辨率納米粒徑分析儀NanocoulterⅠ來分析樣品中每種大小的囊泡的實際數量、濃度及粒子動態(tài)、Zeta電位等。為了進行分析，將先前儲存在-20°C的75μl等分試樣的外泌體制劑用925μlPBS稀釋（得到1ml）并轉移到一次性比色皿中用于DLS測量。北京快速提取外泌體穩(wěn)定性好外泌體富集、分離和檢測是當前外泌體研究的熱點之一。

外泌體的分離方法：目前，有許多可用的外泌體分離方法。比較傳統(tǒng)的外泌體分離方法是超速離心，許多人將其視為金標準。其他技術主要基于大小排阻或抗體介導的標記外泌體分離。每種分離方法在純度、數量、效率和通量方面都不同。超速離心法分離法的缺點是外泌體結構容易發(fā)生改變，造成外泌體的結構不一致性甚至會導致外泌體受損。超濾法：超濾法使用的是微孔過濾器；因此，較大的顆粒將從濾液中排除。它可以與離心結合使用，通過初步去除細胞碎片等大顆粒來加速外泌體的純化。不過使用此方法需要防止孔隙堵，不適合大規(guī)模的樣本處理。

分離外泌體的方法之密度梯度超速離心：有助于根據尺寸、結構和形態(tài)差異分離和分析納米級材料。DGUC“細化”分離的囊泡，并使用密度為1.07g/mL或更低的密度梯度培養(yǎng)基。水中碘沙醇、冰冷的PBS和蔗糖是用于外泌體分離的常見梯度培養(yǎng)基。有市售的碘沙醇密度梯度分餾膜，用于將外泌體與非囊泡成分分離。將生物懸浮液添加到梯度培養(yǎng)基中，并以完整的梯度分層組分。DGUC有助于分離具有相同梯度的樣品。凋亡小體、蛋白質聚集體和其他非外泌體微囊泡可能通過超速離心干擾較終分離的外泌體產物。DGUC有助于克服超速離心的局限性，并提供較純凈的外泌體。DGUC在精細化和高性能外泌體分離方法中的應用。簡而言之，在分離細胞碎片后，應用1×105g用60%碘沙醇離心3小時，然后用1×10離心5用40%碘沙醇g18小時有助于形成多達12個碘沙醇梯度級分和兩個外泌體級分。超速離心使用連續(xù)的密度梯度或逐步梯度來較小化這些顆粒材料對外泌體的干擾。可將不同分離方法結合使用，以提高外泌體分離的效率和分離精度。

外泌體的表征分析：Zeta電位：通過電泳光散射(ELS)測量的Zeta電位測量粒子在電泳場中的速度。Zeta電位是膠體分散體穩(wěn)定性的指標（非常值）和囊泡表面電荷的量度（+或-符號）。電子顯微鏡分析：對于電子顯微鏡分析，外泌體制劑在PBS緩沖液中按1:10稀釋，隨后在等體積的4%(w/v)多聚甲醛和1%(v/v)戊二醛中固定5分鐘。然后將樣品置于formvar-carbon涂層的600目銅網格上，并在室溫下干燥5分鐘。隨后將樣品在乙酸雙氧鈾溶液（2%水溶液）中進行對比，并在電子顯微鏡（Jeol1230TEM）下觀察，加速電壓為80kV，并連接到數碼相機進行觀察。分離外泌體后需要通過電鏡等方式進行鑒定。杭州尿液外泌體蛋白檢測

外泌體可作為一種疙瘩標志物進行檢測，通過其生物學特征進行診斷和治著。濟南外泌體哪家專業(yè)

外泌體蛋白質特征是:膜結合四跨膜蛋白（CD9、CD63、CD81和CD82），以及常規(guī)用于分離的EpCAM和Rab5。其他公認的蛋白質是受體（CD46和CD55）、熱休克蛋白（HSP；Hsc70、Hsp70和Hsp90）、參與外泌體形成的蛋白質（Alix、TSG101）和負責融合和轉運的膜蛋白（GTP酶、膜聯(lián)蛋白和flotillin；ATP7A、ATP7B、MRP2、SLC1A4、SLC16A1和CLIC1)等。使用ELISA法檢測這些標記蛋白可以用于確認外泌體的存在。也有相關研究稱外泌體含有其他顆粒，如膽固醇（B淋巴細胞來源）、鞘脂、磷酸甘油酯和神經酰胺等。外泌體還運輸形態(tài)發(fā)生素（Hedgehog、Wingless和Wingless-like），參與黑腹果蠅所描述的組織模式發(fā)育。濟南外泌體哪家專業(yè)

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