逆轉錄過程由逆轉錄酶催化，此酶也稱依賴RNA的DNA聚合酶（RDDP），即以RNA為模板催化DNA鏈的合成。合成的DNA鏈稱為與RNA互補DNA（complementaryDNA,cDNA）。逆轉錄酶在生物界存在于逆轉錄病毒以及真核細胞（如端粒酶）中，擬逆轉錄病毒沒有單獨的逆轉錄酶，其DNA聚合酶帶有逆轉錄酶的活性，可能與病毒的惡性轉化有關。人類免疫缺陷病毒（HIV）就是一種逆轉錄病毒，含有逆轉錄酶。在小鼠及人的正常細胞和胚胎細胞中也有逆轉錄酶，例如端粒酶就是一種逆轉錄酶，推測可能與細胞分化和胚胎發育有關。逆轉錄過程的揭示是分子生物學研究中的重大發現，是對中心法則的重要修正和補充。重慶彩色逆轉錄混合企業

逆轉錄是指以RNA為模板合成DNA的過程，即將遺傳信息由RNA逆向傳給DNA的過程，其遺傳的傳遞方向與轉錄相反。反轉錄酶也可寫成逆轉錄酶又稱為依賴RNA的DNA聚合酶。是以RNA為模板指導三磷酸脫氧核苷酸合成互補DNA（cDNA）的酶。哺乳類C型病毒的反轉錄酶和鼠類B型病毒的反轉錄酶都是一條多肽鏈。鳥類RNA病毒的反轉錄酶則由兩上亞基結構。真核生物中也都分離出具有不同結構的反轉錄酶。RNA指導的DNA聚合酶活性；以RNA為模板，催化dNTP聚合成DNA的過程。此酶需要RNA為引物，多為色氨酸的tRNA，在引物tRNA3′－末端以5′→3′方向合成DNA。反轉錄酶中不具有3′→5′外切酶活性，因此沒有校正功能，所以由反轉錄酶催化合成的DNA出錯率比較高。成都一體化反轉錄純度高逆轉錄實驗過程中要注意RNA樣品的保存、純化、處理和轉錄酶的選擇。

逆轉錄的轉錄過程：基因的轉錄是由RNA聚合酶催化進行的?；虻纳嫌尉哂薪Y合RNA聚合酶的區域，叫作啟動子。啟動子是一段具有特定序列的DNA，具有和RNA聚合酶特異性結合的位點，決定了基因轉錄的起始位點。RNA聚合酶與啟動子結合后，在特定區域將DNA雙螺旋兩條鏈之間的氫鍵斷開，使DNA解旋，形成單鏈區，以非編碼鏈為模板合成RNA互補鏈的過程就開始了。轉錄的延長是以前面核苷酸的3′-OH為基礎逐個加入NTP，形成磷酸二酯鍵，使RNA逐步從5′向3′端延伸的過程。在原核生物中，因為沒有核膜的分隔，轉錄未完成即已開始翻譯，而且在同一個DNA模板上同時進行多個轉錄過程。電鏡下看到的羽毛狀圖形和羽毛上的小黑點（多聚核糖體），是轉錄和翻譯高效率的直觀表現。

RNA逆轉錄實驗注意事項：去除基因組DNA污染：殘留的基因組DNA(gDNA)會對熒光定量結果造成很大的干擾，為了使結果更加的真實、可重復，我們需要去除gDNA干擾。我們可以在引物設計時避免gDNA的擴增，比如將上下游引物分別設在不同的外顯子上；或者在提取RNA后使用DNaseI處理以除去gDNA。較后，我們還有非常法寶，選擇一款具有gDNA去除功能的逆轉錄試劑盒，一步到位去除gDNA，省心省力max。RNA逆轉錄實驗注意事項：逆轉錄酶熱穩定性：逆轉錄酶在整個反轉錄體系中具有關鍵性影響。除了活性以外，逆轉錄酶的熱穩定性同樣很重要，在較高溫度下進行逆轉錄，能夠減少RNA的二級結構，增加逆轉錄的效率。野生型的M-MLV逆轉錄酶很“怕熱”，高于37℃時，穩定性大幅下降。逆轉錄實驗反應過程中需控制反應溫度，時間和pH值等指標。

miRNA逆轉錄莖環法：首先需要進行RNA樣品制備，可選的方法有：離心柱法抽提（不必去除gDNA）；傳統Trizol法抽提（需要去除gDNA）。miRNA正向引物：需要分別設計。是否采用通用引物視情況而定，正向引物與通用反向引物不會形成二聚體時才能用。取200ul的PCR管，根據所得每組RNA的濃度C，每孔加入1000ng總RNA，按公式1000ng/C計算出所需RNA的體積x。然后按建議的20μL反應體系說明，依次向200μL的PCR管內加入下列試劑：加樣結束后，移液器吹打混勻，低速離心數秒。將逆轉錄PCR管放入PCR擴增儀內，調整參數：37℃15min（反轉錄反應），85℃5s（反轉錄酶的失活反應），4℃∞。反應結束后根據實驗需要進行熒光定量PCR或放入-20℃冰箱保存。說明：此處可以選擇U6下游引物作為U6的逆轉錄引物，注意相應地調整無酶水的體積和反應溫度。逆轉錄在病毒學、免疫學等領域有普遍的應用。北京莖環法逆轉錄酶制造商

逆轉錄實驗前要對反應體系進行無RNA和無反轉錄酶的對照。重慶彩色逆轉錄混合企業

miRNA的加尾法逆轉錄和qPCR，miRNA加尾法逆轉錄：增加miRNA逆轉錄產物長度較直接的方法就是增加miRNA的長度，即在miRNA的3端后面添加一段序列，然后進行逆轉錄反應。因此，加尾法是由兩個酶共同作用完成的，它們分別是PolyA聚合酶和逆轉錄酶。PolyA聚合酶負責給miRNA加上PolyA尾，增加其長度。之后逆轉錄引物結合到PolyA序列上，由逆轉錄酶完成加長版cDNA的合成。miRNA的加尾法逆轉錄和qPCR中的qPCR：miRNA熒光定量PCR的過程跟普通mRNA的相似，但由于加尾法逆轉錄產物的5端均為通用序列，因此其qPCR反向引物都是相同的(通用引物R)，不同的是根據miRNA序列設計的正向引物。正向引物的特異性就變得非常重要。對于內參，生工生物的miRNA加尾法首先鏈cDNA合成試劑盒(B532451)中內置了內參U6的正向引物，使用該引物與通用引物R即可進行內參U6的擴增。重慶彩色逆轉錄混合企業

蘇州英澤生物醫藥科技有限公司擁有生物醫藥和醫療領城內的技術開發、技術咨詢、技術轉讓及相 關的技術服務;化工原料及產品、生物儀器試劑(不含?；?品)、儀器儀表、電子產品的購銷;生物技 術推廣服務;貨物或技術進出口(國家禁止或涉及行政審批的 貨物和技術進出口除外) (依法須經批準的項目， 經相關部門批準后方可開展經營活 動) 一般項目:醫學研究和試驗發展;工業酶制劑研發(除依法須 能分準機項目外等多項業務，主營業務涵蓋RNA\DNA試劑盒，外泌體提取試劑盒，逆轉錄試劑盒，熒光定量PCR。目前我公司在職員工以90后為主，是一個有活力有能力有創新精神的團隊。公司業務范圍主要包括：RNA\DNA試劑盒，外泌體提取試劑盒，逆轉錄試劑盒，熒光定量PCR等。公司奉行顧客至上、質量為本的經營宗旨，深受客戶好評。公司深耕RNA\DNA試劑盒，外泌體提取試劑盒，逆轉錄試劑盒，熒光定量PCR，正積蓄著更大的能量，向更廣闊的空間、更寬泛的領域拓展。